ccn3促进胶质瘤细胞侵袭作用及可能机制研究

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1、中图分类号UDCR739．4l610硕士学位论文学校代—10—533CCN3促进胶质瘤细胞侵袭作用及可能机制研究TheroleandmechanismsresponsibleforinvasionmediatedbyCCN3ingliomacells作者姓名：林泽西学科专业：临床医学研究方向：外科学(神外)学院(系、所)：湘雅医院指导教师：方加胜教授论文答辩日期查堡!￡弓口答辩委员会中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特NDl：i以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

2、人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：—逊￡年』月琴日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：燧瘟捌舷乏一一堕

3、肼硕士学位论文英文摘要CCN3促进胶质瘤细胞侵袭作用及可能机制研究摘要：背景和目的：脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤之一，发病率高、死亡率高、预后差，严重危害人类的健康，而胶质瘤的侵袭是临床治疗效果提高的重要障碍。因此，阐明其发病机理、寻找新的生物学标记物及治疗靶标以提高治疗效果已成为亟待解决的重大课题。肿瘤微环境是近年来肿瘤学研究的热点，肿瘤细胞生物学行为的维持需要其所在的微环境提供支撑。肿瘤微环境包括肿瘤间质细胞创造的微环境和肿瘤细胞自身通过旁分泌或自分泌创造的微环境，本课题将以低恶性胶质瘤细胞A172和高恶性胶质瘤细胞U87为研究模型，观察分泌型蛋E[C

4、CN3在胶质瘤细胞中的作用并初步探讨可能的分子机制。方法：(1)用实时荧光定量PCR实验检测A172和U87细胞中CCN3的表达情况，同时用ELISA检测A172和U87细胞培养上清液中CCN3的蛋白含量；(2)用人CCN3重组蛋白刺激A172细胞，用MTS试验观察细胞的增殖情况，Transwell试验观察CCN3刺激前后A172细胞及U87细胞的侵袭能力；(3)用NF．rd3活性检测报告基因实验检测cCN3刺激前后A172细胞及U87细胞中的NF．1出的活性，同时用westernblot检测相关细胞中NF．r．B上游调控者P13K／Akt／Ird3a的表达

5、水平或活化状态；(4)应用P13K／Akt抑$1j齐IJLY294002单独或与CCN3共同处理A172或U87细胞，观察LY294002能否逆转CCN3诱导的NF．心活性增加和侵袭能力增强。硕士学位论文英文摘要结果：(1)U87细胞中CCN3在mRNA的表达水平是A172细胞中的15．63倍，CCN3在A172细胞培养上清液中的含量是48．62pg／ml，而在U87细胞培养上清液中的含量是549pg／ml；(2)U87细胞的侵袭能力强于A172细胞，10ng／ml的CCN3能明显增强A172细胞的侵袭能力，而对细胞增殖能力无明显影响；(3)U87细胞中NF

6、．rd3活性及P13K和Akt的磷酸化水平高于A172细胞，而Ir,：Ba蛋白水平低于A172细胞，10ng／ml的CCN3能明显上调A172细胞中NF—rd3的活性及P13K和Akt的磷酸化水平，而下调Ir,：Ba的蛋白水平；(4)P13K／Akt抑制剂LY294002能抑制U87细胞中NF．心的活性，下调Akt磷酸化水平，上调I心c【蛋白水平，LY294002能抑制CCN3诱导的A172细胞中Akt磷酸化水平的上调和I出d蛋白的下调，并且LY294002能抑隹JOU87细胞及CCN3诱导的A172细胞的侵袭能力。结论：(1)高恶性胶质瘤细胞中CCN3的表

7、达及细胞培养上清液中CCN3的分泌蛋白含量高于低恶性胶质瘤细胞；(2)CCN3通过活化P13K／AkffNF—r33信号通路促进A172细胞的侵袭；(3)抑制P13K／Akt／NF．1(B信号通路能抑制CQ奶的侵袭促进作用。关键词：胶质瘤；肿瘤微环境；CON3；肿瘤侵袭分类号：R739．41III硕士学位论文英文摘要TheroleandmechanismsresponsibleforinvasionmediatedbyCCN3ingliomacellsAbstract：BaekgroundandObjective：Gliomaisthemostcommoni

8、ntracranialmalignanttumor，