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1、圣和散对脑胶质瘤细胞诱导分化的研究论文夏跃胜王建华吴永忠王欢【关键词】圣和散；,,,脑胶质瘤；,,分化摘要：目的观察圣和散对脑胶质瘤C6细胞株体外生长及诱导分化的作用。方法用圣和散处理脑胶质瘤C6细胞，采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测圣和散对C6细胞增殖的抑制作用,以免疫组化SABC法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和c-myc表达。结果圣和散可显著抑制C6细胞体外增殖，并呈现时间、剂量依赖性。在终浓度为5mg/ml和10mg/ml时,对C6增殖的抑制率达(49.62±1.13)%和(69.38±1.42)%
2、，明显优于对照组（P＜0.01）。免疫组化可见SHP组较对照组GFAP表达明显增强，c-myc表达下降。结论圣和散对胶质瘤C6细胞系的增殖有明显的抑制作用，能通过诱导分化降低脑胶质瘤细胞恶性程度。关键词：圣和散；脑胶质瘤；分化InducingDifferentiationEffectofShenghePoaCellsAbstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofShenghePoaC6celllineinvitro.MethodsBraingliomaC6cellline(M
3、TT)easuretheleveloftheproliferationofC6culturedycofC6cellsmunohistochemicalSABCmethod.ResultsTheproliferationofC6e-dependentmanner.Theinhibitoryrateg/mland10mg/ml,paredycdecreasedsignificantlyinC6cellsculturedalignantdegreebyinducingdifferentiationoftheC6cells
4、.Keya;Differentiation脑胶质瘤是常见的脑肿瘤之一，由于其位置的特殊性和肿瘤本身的高侵袭性，手术难以彻底切除.freela公司）；c-myc单抗（英国Novo公司）;酶联免疫仪（华东电子管厂DG5031型）。1.2方法1.2.1细胞培养鼠源性胶质细胞瘤C6细胞常规培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml庆大霉素的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱内传代培养。2d换液1次，0.25%胰酶消化，传代。1.2.2药物处理将中药SHP（主要含党参、太子参、玄参、炒
5、白术、薏苡仁、土鳖虫、白花蛇舌草、肉苁蓉、蟾蜍、甘草）经多酶乳化流程水提后［3］，喷雾得干燥粉末，取适量磷酸盐缓冲液（PBS）溶解，上清用0.22μm的滤过膜过滤，配制成浓度10mg/ml的药液。1.2.3细胞生长抑制测定取对数生长期C6细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,.freell单细胞悬液,取100μl(含103个细胞)加入96孔板中,培养4h,细胞贴壁,分为实验组(加SHP,终浓度分别为2.5,5,10mg/ml)和空白对照组(不加SHP),培养于37℃,5%CO2培养箱中培养,72h后,加入MTT10μl/
6、孔,继续培养4h,吸去培养液,加入DMSO100μl,将培养板振荡5min,20min以内以570nm为测试波长,630nm为参考波长,在全自动酶标仪上读取各孔吸光度(A值),每组8孔。肿瘤细胞生长抑制率的计算：抑制率(%)=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%。1.2.4免疫组化SABC染色法检测GFAP和c-myc表达在规定培养时间取SHP处理组和对照组的C6细胞爬片,洗涤后经纯丙酮室温固20～30min,蒸馏水洗;纯甲醇加H2O2至0.5%,室温浸泡30min。蒸馏水洗3次；滴加正常山羊血清封闭液
7、,室温20min后甩去多余液体；分别滴加适当稀释的一抗(1∶100)GFAP(小鼠IgG)和c-myc单抗,37℃1h,0.1mol/LPBS洗2min3次;滴加生物素化山羊抗小鼠IgG,37℃20min,0.1mol/LPBS洗2min3次;滴加试剂SABC,37℃20min,0.1mol/LPBS洗5min4次;室温下DAB显色,蒸馏水洗涤,在400倍光镜下观察,阳性反应细胞核呈棕色或棕黄色。PBS代替一抗作空白对照。每张切片随机抽取视野，至少计算1000个细胞，阳性细胞所占比率为GFAP和c-myc表达的百分
8、数。1.2.5统计学处理所得数据以±s表示,数据分析采用单因素方差分析。数据由SPSS10.0软件包处理,P0.05为显著差异性。2结果2.1SHP对C6细胞增殖的抑制作用SHP对C6细胞增殖有显著的抑制作用,且存在时间、剂量与抑制率的量-效关系。结果见表1~2。表1时间与抑制率的量-效关系（略）与24h比较，*P＜0.05表2剂量与抑制率的量-效关系（略）
