rsk2通过调节stat2活性介导thp-1单核细胞分化为巨噬细胞

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1、中图分类号R392，1UDC610硕士学位论文学校代码10533RSK2通过调节STAT2活性介导THP．1单核细胞分化为巨噬细胞RSK2mediatesTHP一1monocytedifferentiationintomacrophagethroughregulationofSTAT2activity作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：黄玉梅免疫学肿瘤免疫基础医学院黎明副教授论文答辩日期型堡丛塑答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论

2、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：量圣插日期：型l三年』月堕目学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：遣j吐照导师签名鳖尘虻

3、日期：啦年上月丛日RSK2通过调节STAT2活性介导THP．1单核细胞分化为巨噬细胞摘要：STAT2是核转录因子STAT家族成员，JAK／STAT途径是其活化的经典途径，SD盯2通过酪氨酸磷酸化而具有转录活性。RSK2是丝氨酸／苏氨酸激酶家族成员，可磷酸化多种底物，从而在不同刺激下在特定微环境中调节细胞增殖、分化、凋亡、存活等生物学效应。目的：探讨RSK2活化STAT2促进单核细胞分化的机制。方法：用CheckMateTMMammalianTwo．Hybridsystem结合报道基因技术研究RSK2与STAT2的相互作用，根据RSK2功能域，构建RSK2不同缺失片段的真核表达质粒，分

4、别与pCMV-Myc．STAT2质粒共转染HEK293细胞，免疫共沉淀技术探讨RSK2与STAT2结合及结合的具体功能域；构建Cyl(VH3)．1uc报告质粒，与pcDNA4．RSK2和pCMV-Myc．STAT2共转染HEK293，检测荧光素酶活性；荧光显微镜术和胞浆胞核分离结合免疫印迹技术检测PMA刺激下STAT2的核移位；PMA刺激HEK293细胞，不同时间点收集细胞裂解液，免疫沉淀技术结合免疫印迹技术检测STAT2的丝氨酸．苏氨酸磷酸化；纯化获得GST-STAT2融合蛋白作为底物，免疫共沉淀获得活化RSK2作为激酶，进行体外激酶实验，检测STAT2的磷酸化；转染RSK2和ST

5、AT2质粒于单核细胞THP．1，PMA刺激后，直接光学显微镜观察和流式细胞术观察细胞形态变化、采用XTT实验间接检测细胞贴壁率。结果：RSK2通过N．端与STAT2结合，PMA刺激下RSK2磷酸化STAT2，促进STAT2的反式转录活性和核移位。体外实验证明STAT2的C．端和N．端存在被RSK2磷酸化的丝氨酸残基。初步实验表明活化的RSK2激活STAT2促进THP．1分化。结论：PMA刺激活化MAPK／ERKl／2／RSK2途径，活化的RSK2使STAT2发生丝氨酸／苏氨酸磷酸化并移位入核，发挥反式转录活性，进而促进THP．1单核细胞分化为巨噬细胞。我们的研究为通过对信号转导途径的

6、研究阐明细胞生物学行为分子机理提供了一个重要实验依据。图29幅，表5个，参考文献68篇。关键词：分化；单核细胞；RSK2；丝氨酸磷酸化；STAT2分类号：R392．1RSK2mediatesTHP一1monocytedifferentiationintomacrophagethroughregulationofSTAT2activityAbstraet：SL气T2isamemberofS1ArSfamily．JAK／STATsignalpathwayiStheclassicalpathwayforSTATSactivation．S卫盯2acquirestranscriptionact

7、ivityafteritstyrosinephosphorylationbyJAK．RSK2isamemberofSerine／Threoninekinasefamily,whichphosphorylatesmanykindsofsubstratesresultingindifferentiation．apoptosisandsurvival．objeetive：ToinvestigatethemechanismofTm一1monocytediffere