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时间:2019-05-17
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1、分类号R541密级公开UDC610学校代码10555硕士学位论文(专业学位)ox-LDL通过PKA/PKC途径上调PHF2促进THP-1巨噬细胞炎症反应研究生姓名:李永朝指导教师:、职称桂庆军教授专业学位类别(领域):临床医学(内科学)研究方向:内科学(心血管病)所在学院:第二临床学院二〇一八年五月ox-LDL通过PKA/PKC途径上调PHF2促进THP-1巨噬细胞炎症反应摘要目的:本实验通过培养THP-1巨噬细胞,探讨蛋白激酶(proteinkinase,PK)/PHF2途径在ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞的炎症反应过程中的作用,从而进
2、一步明确动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)的发生机制。方法:利用ox-LDL处理THP-1巨噬细胞,采用RNA干扰和特异性抑制剂,Westernblotting和PCR检测PKA、PKC、PHF2、TNF-α、CXCL4、CXCL10的表达和活性变化。结果:1.WesternBlotting结果显示ox-LDL可呈浓度依赖性上调THP1巨噬细胞中PKA、PKC蛋白的表达水平(p<0.05),差异具有统计学意义。2.WesternBlotting结果显示ox-LDL组较PBS组PKA和PKC蛋白质表达水平均升高(p<0.05),差异具有统计学意义。而加入PKA抑制剂、PKC抑制
3、剂后PKA和PKC蛋白质表达较ox-LDL组降低(p<0.05),差异具有统计学意义。WesternBlotting和RT-PCR结果显示ox-LDL组较PBS组TNF-α蛋白质和mRNA表达水平均升高,而PKA抑制剂或PKC抑制剂后TNF-α蛋白质和mRNA表达水平均降低(p<0.05),差异具有统计学意义。3.WesternBlotting结果显示ox-LDL组PHF2蛋白表达水平较PBS组、nLDL组明显增高(p<0.05),差异具有统计学意义。PHF2siRNA组较ox-LDL组表达水平明显降低(p<0.05),差异具有统计学意义。4.WesternBlotting和PCR结果显示ox
4、-LDL组较PBS组PHF2蛋白质和mRNA表达水平均升高(p<0.05),差异具有统计学意义。而I加入PKA抑制剂、PKC抑制剂后PHF2mRNA表达较ox-LDL组降低(p<0.05),差异具有统计学意义。5.PCR结果显示ox-LDL组TNF-α、CXCL4、CXCL10mRNA表达水平较PBS组、nLDL组明显增高(p<0.05),差异具有统计学意义。PHF2siRNA组TNF-α、CXCL4、CXCL10mRNA较ox-LDL组表达水平明显降低(p<0.05),差异具有统计学意义。结论:ox-LDL可以通过PKA/PKC途径上调PHF2表达促进THP-1巨噬细胞TNF-α、CXCL4
5、、CXCL10等炎症因子表达。关键词:THP1巨噬细胞炎症血浆低密度脂蛋白蛋白激酶途径植物同源结构域指蛋白2IIOX-LDLUPREGULATESPHF2EXPRESSIONTHROUGHTHEPKA/PKCPATHWAYTOPROMOTEINFLAMMATIONINTHP-1MACROPHAGESLiYongchao(Cardiology)Directedby:GuiQingjunAbstractObjective:Thisexperimentwastoexploretheroleofproteinkinase(PK)/PHF2pathwayinox-LDL-inducedinflammat
6、oryreactioninTHP-1macrophages,soastofurtherclarifythemechanismofatherosclerosis.Methods:Weusedox-LDLtoinduceinflammatoryreactioninTHP-1macrophages,usingRNAinterferenceandspecificinhibitors,WesternblottingtechniqueandPCRwasusedtoexplorePKA、PKC、PHF2、TNF-α、CXCL4、CXCL10expressionlevelsandthechangeofacti
7、vity.Results:1.WesternBlottingshowedthatox-LDLcanincreasetheproteinlevelsofPKAandPKCinTHP1macrophagesindose-dependentmanner(p<0.05),thedifferenceisstatisticallysignificant.2.WesternBlottingresultsshow
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