炎症应激通过激活mTOR通路诱导THP-1巨噬细胞泡沫化的实验研究.pdf

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1、1目录1炎症应激通过激活mTOR通路诱导THP-1巨噬细胞泡沫化的实验研究………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………11.3前言……………………………………………………………11.4.实验一巨噬细胞的培养及鉴定……………………………121.4.1材料和方法……………………………………………………21.4.2结果……………………………………………………………201.4.3讨论……………………………………………………………23

2、1.5实验二炎症应激通过激活mTOR通路诱导THP-1巨噬细胞泡沫化的实验研究……………………………………………241.5.1材料和方法……………………………………………………241.5.2结果……………………………………………………………351.5.3讨论……………………………………………………………461.6结论……………………………………………………………501.7参考文献………………………………………………………511.8英汉缩略词对照表……………………………………………58-2-2致谢………………………………………………………

3、……603INSIG-SCAP-SREBPs通路与炎症(综述)…………………61-3-炎症应激通过激活mTOR通路诱导THP-1巨噬细胞泡沫化的实验研究摘要目的：研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过激活mTOR通路，增加SCAP/SREBP2表达，干扰SCAP/SREBP2负反馈调控，增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取，导致泡沫细胞形成。方法：1、诱导分化成功的THP-1源性巨噬细胞在无血清培养基中培养4h后，分为对照组（5ug/mlLDL），炎症刺激组（5ug/mlLDL+200ng/mlL

4、PS），炎症+雷帕霉素组（5ug/mlLDL+200ng/mlLPS+10ng/mlRapamycin），以上各组细胞培养24h后收获。2、油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况。3、Real-timePCR法检测LDLr、SREBP2、SCAP、S6K1和mTORmRNA水平。4、Westernblot法检测LDLr、S6K1、和mTOR蛋白表达。5、激光共聚焦法检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。6、统计：统计软件SPSS20.0，数据表示为均数±标准差（mean±SD）。采用t检验分析两组差异，P＜0.05表示差异有统计学意义

5、。结果：1、油红O染色发现，炎症应激增加THP-1巨噬细胞内脂质沉积，雷帕霉素抑制炎症应激诱导的脂质聚积。2、THP-1巨噬细胞LDLrmRNA变化：对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组LDLrmRNA的表达分别为1、1.82±0.35和0.33±0.14。炎症刺激组与对照组比较，LDLrmRNA显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较，LDLrmRNA表达下调（P＜0.05）。3、THP-1巨噬细胞SREBP2mRNA变化：对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组SREBP2mRNA的表达分别为1、2.21±0.35和0.

6、33±0.21。炎症刺激组与对照组比较，SREBP2mRNA显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与-4-炎症刺激组比较，SREBP2mRNA表达下调（P＜0.05）。4、THP-1巨噬细胞SCAPmRNA变化：对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组SCAPmRNA的表达分别为1、2.15±0.48和0.61±0.33。炎症刺激组与对照组比较，SCAP显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较，SCAP表达下调（P＜0.05）。5、THP-1巨噬细胞S6K1mRNA变化：对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组S6K1mRNA

7、的表达分别为1、1.26±0.22和0.8±0.5。炎症刺激组与对照组比较，S6K1mRNA显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较，S6K1mRNA表达下调（P＜0.05）。6、THP-1巨噬细胞mTORmRNA变化：对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组mTORmRNA的表达分别为1、1.38±0.7和0.3±0.7。炎症刺激组与对照组比较，mTORmRNA显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较，mTORmRNA表达下调（P＜0.05）。7、THP-1巨噬细胞LDLr蛋白变化：炎症刺激组与对照组比较，

8、LDLr蛋白表达显著上调（P＜0.05）；炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较，LDLr蛋白表达下调（P＜0.05）。8、THP-1巨噬细胞S6K1蛋白变化：炎症刺激组与对照组比较，S6K1蛋白表达显著上调（P＜