mtor通路在游离sio2粉尘诱导肺泡巨噬细胞自噬中的机制研究毕业论文

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1、学号：201095110119毕业论文GRADUATETHESIS设计题目:mTOR通路在游离SiO2粉尘诱导肺泡巨噬细胞自噬中的机制研究2015年06月04日摘要摘要目的：通过体外培养大鼠肺泡巨噬细胞，使用mTOR抑制剂雷帕霉素抑制mTOR信号通路，游离SiO2粉尘诱导自噬，观察巨噬细胞自噬水平的差异，进一步明确在细胞水平上该信号通路在游离SiO2粉尘诱导肺泡巨噬细胞自噬活动中的机制。方法：选取SPF级健康雄性Wistar大鼠。麻醉后，采用支气管肺泡灌洗法，离心获得肺泡巨噬细胞，贴壁培养纯化。将肺泡巨噬细胞分为对照组，矽尘组，矽尘+雷帕霉素组。

2、运用Westernblotting测定各组mTOR蛋白以及LC3蛋白表达水平，共聚焦荧光显微镜观察巨噬细胞自噬水平。结果：与对照组相比，矽尘组和矽尘+雷帕霉素组的mTOR蛋白表达水平明显下降，LC3蛋白表达水平明显增加。与矽尘组比较，矽尘+雷帕霉素组的mTOR蛋白表达明显下降，LC3蛋白表达水平明显增加。结论：游离SiO2粉尘可诱导肺泡巨噬细胞发生自噬，mTOR信号通路被抑制后，自噬的发生显著增加，表明mTOR通路在游离SiO2粉尘诱导肺泡巨噬细胞自噬的过程中起到抑制的作用。关键词巨噬细胞；自噬；mTOR通路AbstractAbstractObj

3、ectives:Byculturingratalveolarmacrophagesinvitro，UsingthemTORinhibitorsrapamycininhibitmTORsignalingpathways，FreeSiO2dustinducealveolarmacrophagesautophagy.Thenobservethedifferencesinthelevelsofmacrophageautophagy,furtherclearthemanifestationofthesignalingpathwaysonthecelllev

4、elinfreeSiO2dustinducedalveolarmacrophagesactivity.Methods:SelectSPFhealthmaleWistarrats.Afteranesthesia,usingthemethodofbronchoalveolarlavage,centrifugingtogetalveolarmacrophages,adherentcultureandpurification.Thealveolarmacrophageisdividedintocontrolgroup,silicondustgroup,s

5、ilicondust+rapamycingroup.UsingWestemblottingdeterminatemTORproteinandLC3proteinexpressionlevelsofeachgroup.Usingconfocalfluorescencemicroscopy obsivethelevelofmacrophagesautophagy.Results:Comparedwithcontrolgroup,themTORproteinexpressionlevelofsilicondustandsilicadust+rapamy

6、cingroupdecreasedobviously,LC3proteinexpressionlevelincreasedsignificantly.Comparedwithsilicondustgroup,themTORproteinexpressionofsilicondust+rapamycingroupdecreasedobviously,LC3proteinexpressionlevelincreasedsignificantly.Conclusions:FreeSiO2dustcaninducealveolarmacrophagesa

7、utophagyoccurs.WhenmTORsignalingpathwayshasbeeninhibited,theoccurrenceofautophagyincreasedsignificantly,showedthatmTORpathwaymanifestsinhibitioneffectintheprocessoffreeSiO2dustinducingalveolarmacrophagesautophagy.Keywordsmacrophages;autophagy;mTORsignalingpathways目录目录摘要IAbstr

8、actII1前言11.1研究背景11.2目的及意义11.2.1研究目的11.2.2研究意义22材料与方法32.1主要试剂32.2主要仪器