巨噬细胞微粒通过激活mapk信号通路诱导thp-1细胞产生il-8

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1、’分类号Ｒ４４６密级公开ＵＤＣ６１０学校代码１０巧５硕：ｉ：学位论文（专业学位）Ｅ嗤细胞微粒通过激活ＭＡＰＫ信号通－ＴＨＰ－化路诱导１细胞产生８研究生姓名：李贤指导教师、职称：王德明教授专业学位类别（领域）；麻醉学研究方向：ＡＬＩ发病机制及防治所在学院：南华大学第二临床学院２０１５年５月義＃义索ＡＰＫＴＨＰ－巨嗤细胞微：粒通过激活Ｍ信号通路诱导１细胞产生化－８论文作者签名：考喉指导教师签名：论文评阅人；１禄巧评阅人２；Ｈ词评阅人３：答

2、辩委员会主席：偏专心委员１：至委＾委员２；向命名委员３；委员４：ｉ巧委员５：委员６：答辩日期》曰：Ｖ皆年广月？南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献巧已在论文中作了明确的说明。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担

3、＞／作者签名：乎仁（Ｊ章的卢本南华大学学位论文版权使用授权书学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得＾＾＾其学它校单位有的权名保义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文据的全部或部分内容，可采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根博硕国家±学或位湖论南省文全有文关数部据口库规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库

4、出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录涉到密《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于的学位论文，解密后适用该授权。－作导者师签签名：辦Ｍ掉Ｊ月リ曰名：１／＾辟ｒ月／＾曰巨噬细胞微粒通过激活MAPK信号通路诱导THP-1细胞产生IL-8中文摘要：目的：巨噬细胞微粒是介导慢阻肺、糖尿病、慢性肾病等病发病的重要病因。目前研究已得知，巨噬细胞微粒引起的过度炎症反应导致的免疫损伤是其致病的主要原因，但是巨噬细胞微粒引起过度炎症反应的具体发病机制尚不明确。本实验研究旨在探讨巨噬细胞

5、微粒能否诱导人单核细胞(THP-1)产生炎症因子IL-8，以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在巨噬细胞微粒诱导THP-1细胞产生炎症因子IL-8的过程中的作用，进一步探讨巨噬细胞微粒的致病原理。方法：参照Nakamura和YangSR的方法，用注射器连续抽吸收集2支完全燃烧的香烟的烟雾，随后将烟雾慢慢注射到不含血清的20ml培养基中，得到浓度为10%的香烟烟雾提取物（cigarettesmokeextract，CSE）溶液。THP-1细胞用含佛波酯（PMA）的培养基处理24h后再用含2.5%的CSE的培养基刺激20h，随后收集微粒并作3456流式细胞术

6、检测。分别用10、10、10、10/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含佛波酯（PMA）的培养基刺激24h的THP-1细胞，分别在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集细胞后ELISA方法检测IL-8。510/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含PMA的培养基刺激24h的THP-1细胞，分别在0min，15min，30min，60min停止刺激。Westernblotting方法分别检测ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分别用1IμM、10μM、30μM的p38特异性抑制剂SB203580、JNK特异性抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD9

7、8059预处理已被5PMA刺激的THP-1细胞，30min后再用10/ml巨噬细胞微粒刺激THP-1细胞12h，并用ELISA方法分析不同抑制剂对IL-8产生的影响。结果：(1)用含2.5%的CSE的培养基培养经PMA处理的THP-1细胞20h后，能明显诱导THP-1细胞产生巨噬细胞微粒。(2)ELISA结果表明，不同浓度组的巨噬细胞微粒都能明显刺激THP-1细胞产生IL-8。细胞上清中IL-8含量随微粒处理浓度的增5加表现为逐渐升高的趋势，当微粒浓度为10/ml时达到最高。在同一浓度组间，随着处理时间的递增，IL-8的含量逐渐升高，在12h时IL-8产生最多

8、，随后下降。(3)WB图片表明，巨噬细