褪黑素的羟自由基清除用用与神经保护

《褪黑素的羟自由基清除用用与神经保护》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海医科大学博士学位论文褪黑素的羟自由基清除用用与神经保护姓名：李学君申请学位级别：博士专业：神经生物学指导教师：孙凤艳2000.5.11．中文摘要褪黑素豹羟自由基清除作蔫与裤经保护{褪黑素(N一乙酰-5-甲氧基色胺)，是主要由松果俸腺分泌的一种激素样物质。褪黑索作用广泛，窀是调节人体或动物昼夜节律的重按耱震，与睡眠节律、免疫功能、衰老等都有关系；近来还发麓它具有强大的清除自由基的作用。褪黑索对多种自由基如单线态氯(10：)、一氧化氮(NO)及羟鸯由基(·O}{)零霄直接的清除作用，并盈对许多产生自由基的物质或病理过程所致的氧化损伤有

2、对抗作用。童耱傣痰秘蠡由基主要包括超氧弱离子(0：一)、单线态簸、羟鸯由基和No等含氧自由基。生理情况下，自由基的生成与清除之间保持蔫磺态镌平衡，担震莱些病理情况下，囊虫基可欠量生成，超过极钵镌清除能力而造成损伤。如在脑缺血尤其是再灌注时自由基火量产生，并；l起神经缎胞的擐伤。英中生成戆§，一在金属离子(二价铁离子)的催化下可生成·OH，NO也可与O，一反成生成过氧化贩硝酸(0NOOH)再生成-OH；而且，·o珏是活性最高、毒挂最失媳盎幽基，鼹此·O牲在自由基引起的损伤中起了非常重要的作用。研究表明，褪黑素在体纷可轰接清除羟盎出基，晒

3、且对艟组织、微血管缺血蒜灌损伤有保护作用。但是，褪黑索是否可直接影响缺血性神经元损伤中生成的羟自由基尚泰见掇道。另外，自由基在MPTP引起的DA能神经细胞损伤中也起了关键的作用；MPTP的代谢物MPP+通过巍素和力的DA转运体被DA能神经苑选择性摄取并聚集在线粒体。MPP+可以抑制线粒体复合物I的活帔，进而影响电子链的传递与氧化磷酸化，使自由基生成增加，而且农MPP+代谢串透产生了大量的自由基。在黑质(DA能神经无聚集的部位)，二价铁离子浓度很高，这使得高毒性的·oH大繁产生并在随后的损锈中起重要作蔺。作为一个稂强的鸯由基清除翻，褪黑

4、素对MPTP引起的自由慕的产搬及损伤有什么影响呢?已有研究表明，褪黑素可以降低MPTP；l起的簇伤及脂质过氧纯，但是褪黑素对MPTP；

5、起酶羟自由慕的生成及DA降低的影响尚未见报道。广⋯7。为了明确褪黑索对秘缝塞赣中产生的羟鑫蠢基戆盏接影响，本磺究运用高效液相色谱(HPLC)电化学检测、微透析等技术，在整体脑缺血再灌注、离体脑片缺氧再给氧及MPTPDA能神经损伤模型上，观察褪黑素对上述过程中生成的羟自由基的影响；在此基础上，本研究又采用药理分析和免疫组织化学等技术进一步探讨褪黑素在缺血、缺氧损伤及MPTP致DA能神经损伤中的神经保护作

6、用及可能机制。结果如下：、1．1褪黑素抑制神经损伤致羟自由基的产生＼1．1．1褪黑素减少缺血再灌注中脑内羟自由基的生成本研究观察在大脑中动脉栓线法致局部脑缺血再灌注模型(MCAO)中，褪黑素对缺血再灌注中DHBA含量(·oH与水杨酸的加成物)的影响。动物分为缺血+溶剂对照(n=7)、缺血+褪黑素4mg／kg(n=5)两组。在缺血16-30min、再灌注卜15min、再灌注16-30min，透析液中DHBA含量与缺血前(以1来计)比分别为1．38+0．10、1．67+o．13和1．36+0．08，均比缺血前显著升高(尸<0．05)。而缺

7、血1-15min透析液中DHBA含量与缺血前比无显著差异。在缺血+褪黑素组，透析液中DHBA含量在缺血再灌过程中未见明显变化；与溶剂对照组相比，褪黑素显著降低缺血再灌后DHBA含量的升高。结果表明，脑缺血尤其是再灌注时羟自由基生成增加，而褪黑素对缺血再灌中生成的羟自由基有清除作用。1．1．2褪黑素对缺氧再给氧致皮层脑片DHBA生成的抑制作用在离体大鼠皮层脑片缺氧再给氧模型上，我们观察了不同剂量的褪黑素对缺氧再给氧中羟自由基生成的影响。动物分为缺氧+溶剂对照(n=7)、缺氧+褪黑素O．01(n=6)、0．1(n=7)、0．5(n=6)及

8、1(n=6)mmol／L五组。结果显示，在对照组，孵育液中2，5-DHBA及2，3-DHBA的含量在缺氧前分别12±1“g／gprotein和14．1三1．oug／gprotein，缺氧30min、再给氧15min后孵育液中2，5-DHBA含量为40±4、66+6“g／gprotein，2，3-DHBA含量为32±2、56+3ug／gprotein，均比缺氧前显著升高(P<0．05)。给予褪黑素可以显著降低再给氧后DHBA含量的升高，但对缺氧后的DHBA水平没有显著性影响。在缺氧+褪黑素0．01、0．1、0．5及1蚴ol／L组，再给氧

9、15min后2，3-DHBA的含量分别为51+1、46+3、40+5和34+2嵋／gprotein；与对照组相比，0．5及lmm01／L褪黑素组的2，3-DHBA含量显著降低(P<0．05)。与之类似，褪黑素也可剂量依赖