水杨酸法测定羟自由基的清除能力实验

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1、水杨酸法测定黄酮对羟自由基清除能力的实验一、实验原理利用Fenton反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+=·OH+H2O+Fe3+在反应体系中加入水杨酸，Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成于510nm处有特殊吸收的2,3-二羟基苯甲酸，反应式如下：如果向反应体系中加入具有清除羟自由基功能的被测物，就会减少生成的羟自由基，从而使有色化合物的生成量相应减少。采用固定反应时间法，在510nm处测量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，以测定被测物对羟自由基的清除作用。其清除率计算公式为：羟自由基清除率(%)=A0－(Ax－Ax

2、0)/A0·100其中A0为空白对照的吸光值，Ax为加样品的吸光值，Ax0为不加显色剂H2O2二、实验步骤各溶液的加入量按照表1所示，在比色管中依次先加入9mmol/LFeSO4，9mmol/L乙醇-水杨酸，接着加入适量去离子水，最后加入8.8mmol/LH2O2后摇匀，37℃水浴加热15min后取出，测其吸光度A0。A0测定时，参比溶液为不加双氧水的体系。按上述方法，加入表1所示的各溶液，来测定吸光度Ax、Ax0。Ax和Ax0测定时，参比溶液为去离子水。三、试剂配制9mmol/L乙醇-水杨酸配法：称1.243g水杨酸，乙醇溶解，定容至

3、100mL，然后稀释10倍；9mmol/L硫酸亚铁配法：称2.502gFeSO4·7H2O，去离子水溶解，定容至100mL，然后稀释10倍。8.8mmol/LH2O2配法：称9.926g30%H2O2，去离子水定容至100mL，然后稀释100倍。四、实验结果样品体积/mlAoAxAxo清除率（％）10.8760.8460.09614.3820.9000.7650.15432.1130.9030.7180.24147.1850.8850.6830.32659.6670.8460.6610.50781.8090.8700.4330.3418

4、9.425100.8000.4810.40089.50羟自由基清除率（水杨酸法）公式为：清除率I％=（Ao+Axo-Ax）/Aox100％样品（干花豆）为0.1313g/60ml水Vc体积/mlAoAxAox清除率%10.8770.7840.02413.3420.8970.7810.02215.3030.8970.7470.02018.9050.8990.6720.01827.3370.9000.5470.01641.0090.8870.4890.01446.45110.8870.3710.01660.00130.9000.3310.0

5、1464.26样品：0.0250gVC加500ml娃哈哈纯净水。