中药清除羟自由基实验的改良

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1、中药清除羟自由基实验的改良余庆皋，刘捷频，吴梅青【摘要】　　目的对邻二氮菲-Fe2+氧化法进行改良，使其在用于自由基清除剂筛选时更为有效和更为敏感。方法在不同的pH环境、不同的保温时间及不同的测定波长条件下进行对比实验。结果邻二氮菲-Fe2+络合物在pH4.5的环境下及510nm的测定波长时有较大的吸光度，30min的保温时间使各管有较大并较为稳定的吸光度。结论通过对邻二氮菲-Fe2+氧化法的实验改良能提高该方法筛选自由基清除剂的灵敏度。【关键词】自由基清除剂；邻二氮菲；羟自由基　　Abstract：ObjectiveTheimprovementcanbecarriedoutt

2、otheoxidationofphenathroline-Fe2+inordertobeeffectiveandmoresensitiveinscreeningthefreeradicalscavenger.MethodsMakingexperimentsbyparingtheconditionsofdifferentpH,heatpreservationsandvariousentofpH4.5,andtheabsorbanceorestableafterthe30minheatpreservation.ConclusionTheimprovementcanincreaset

3、hesensibilityforsereeningthefreeradicalscavenger.　　Key波长的最大吸收减弱，A536明显降低。当反应体系中存在·OH清除剂时，此氧化过程受抑制，A536则降低不明显，并可通过A536值比较·OH清除剂的清除能力〔5〕。对该实验进行三个方面的改良：一是将反应环境由pH7.4改为pH4.5的酸性环境；二是将37℃保温时间由60min改为30min；三是测定吸光度的波长由536nm改为510nm。实验过程中分别在pH7.4的磷酸缓冲液及pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲液的环境下进行对照实验；在保温5～60min的时间范围内、536nm和5

4、10nm波长分别测定吸光度，比较两种pH条件下吸光度的差异。反应中依次加入邻二氮菲、缓冲液、自由基清除剂维生素C、Fe2+及H2O2为加药管；不加维生素C为氧化管；不加维生素C及H2O2为对照管。　　1.4统计学处理组间采用t检验，数据以±s表示。　　2结果　　2.1不同测定波长及不同pH环境下的比较从表1可以看出，邻二氮菲-Fe2+络合物的最大吸收波长为510nm，而最佳酸碱环境为pH4.5。表1不同测定波长及不同pH环境下的比较(略）　　2.2不同保温时间及不同pH环境下的比较图1显示了pH7.4时不同保温时间对A510的影响，对照管吸光度于15min时达高峰，随后缓慢下降

5、；而加药管和氧化管吸光度一开始便呈现急剧下降的趋势。图2显示了pH4.5时不同保温时间对A510的影响，对照管吸光度于30min时达高峰，此后处于基本稳定状态；加药管和氧化管吸光度均于30min后才出现较明显的下降。　　2.3各管之间吸光度的变化值（ΔA）比较从表2可以看出，随着保温时间的延长，各管之间的ΔA逐渐加大，但pH4.5时的ΔA加药管-氧化管，在30min时最大，此后较为稳定。表2各管之间吸光度的变化值（ΔA）比较（略）　　3讨论实验表明，邻二氮菲-Fe2+络合物在酸性条件下（pH4.5）比较稳定，有较高的吸光度，并且最大吸收波长为510nm。而保温时间也是实验中的一

6、个重要环节，保温到某一时间时，各管的吸光度较大，同时各管之间的吸光度变化值（ΔA）也较大，有利于自由基清除剂的甑选。从实验中观察到，在pH4.5的条件下，对照管保温到30min有最大的吸收峰，加药管也有较大的吸光度，使加药管与氧化管之间ΔA（ΔA加药管-氧化管）达到最大，该值更能说明自由基清除剂的作用强弱，是判断自由基清除剂的重要指标，并且还能反映该方法的灵敏度。而在pH7.4时，加药管和氧化管一开始便呈现急剧下降的趋势，虽然两管吸光度有所差异，但ΔA加药管-氧化管较pH4.5时要小得多，不具有说服力，也降低了反应的灵敏度。综上所述，采用邻二氮菲-Fe2+氧化法衡量自由基清除剂

7、的作用时，最佳反应条件为pH4.5，测定波长为510nm，37℃保温时间为30min。【