中药复方qhf抑制人肝癌hepg2细胞转移的实验研究

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1、分类号R96密级公开UDC610硕士学位论文中药复方QHF抑制人肝癌HepG2细胞转移的实验研究学位申请人：王泉学科专业：药理学指导教师：陈涛教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineResearchonChineseHerbalCompoundQHFInhibitsLiverCancerCellHepG2MetastasisGraduateStud

2、ent:WangQuanMajor:PharmacologySupervisor:Prof.ChenTaoChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全

3、意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果

4、。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：研究中药复方QHF对人肝癌HepG2细胞侵袭转移的抑制作用及可能的机制，为寻找有效的抗肝癌转移药物和治疗靶点提供实验依据。方法：以不同浓度的QHF（QHF1-5）干预HepG2细胞，MTT法观察QHF对HepG2细胞的增殖抑制作用；采用细胞划痕实验定性的观察QHF对HepG2细胞迁移的影响；在此基础上，利用Transwell实验，小室包被Matrigel基质胶，体外模拟基底膜，进行迁移和侵袭实验，定量观察QHF对HepG2细胞迁移和侵袭能力

5、影响。Westernblot检测QHF对MAPK信号通路的影响，分别使用ERK、p38、JNK抑制剂后观察QHF对HepG2细胞侵袭转移的影响。Elisa方法检测MMPs家族MMP-2、MMP-9和MMP-13水平的变化。结果：1.MTT实验结果：不同浓度的QHF作用于人肝癌HepG2细胞24h、48h、72h后，细胞出现增殖抑制，并且这种抑制作用具有剂量依赖性。随着QHF浓度的不断增加，其对HepG2细胞的增殖抑制作用更明显：不同浓度之间均有差异，且随着QHF浓度的增加，抑制率不断增加（p<0.05

6、）。不同时间组之间也有差异，各浓度组24h的抑制率均大于48h，72h组抑制率最大。药物作用24h在QHF1-QHF3浓度内，其对细胞的生长增殖影响较小，其抑制率为14%-22%，因此选择这三个浓度进行细胞侵袭转移实验的研究。2.QHF抑制人肝癌HepG2细胞运动的实验研究：划痕实验结果显示：QHF干预组划痕损伤区发生迁移的细胞数目明显少于正常对照组，提示QHF有抑制HepG2细胞迁移的趋势；Transwell迁移和侵袭性实验结果显示：与正常对照组比较，QHF各干预组穿过膜的细胞数目明显减少，差异具有

7、统计学意义（P<0.05或P<0.01）。3.QHF对MAPK信号通路的影响：Westernblot结果显示，QHF干预肝癌HepG2细胞24h后，p-ERK的表达明显下降，p-p38和p-JNK的表达量增加，差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01），但ERK、p38及JNK的总蛋白量基本不变。而分别使用ERK、p38和JNK抑制剂后，侵袭实验结果发现，ERK抑制剂和QHF发挥协同作用，而JNK和p38抑制剂部分逆转了QHF抑制肝癌细胞转移的作用，差异具有统计学意义（P<0.05）。4.QHF

8、对MMPs分泌的影响：Elisa结果显示：QHF能减少MMP-2的分泌，差异有统计学意义（p<0.05），而对MMP-9和MMP-13的分泌未见明显影响。结论：中药复方QHF可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及迁移侵袭能力。其抑制HepG2侵袭转移作用可能通过以下机制：（1）影响MAPK信号转导通路，其中包括：活化p38、JNKMAPK，抑制ERK而发挥作用。（2）抑制MMPs的表达，其中与MMP-2有更密切的关系。关键词：肝细胞癌中药复方QHF侵袭MAP