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时间:2019-02-27
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1、季雪:南蛇藤提取物抑制人肝癌HepG2细胞转移的相关机制研究南蛇藤提取物抑制人肝癌细胞HepG2转移的相关机制研究MechanismsoftheCelastrusOrbiculatusExtractsInhibittheMetastasisinHumanHepatocarcinomaHepG2Cells研究生:季雪导师:刘延庆教授专业:中西医结合临床基金项目:1.国家自然科学基金项目(No.81274141)2.国家自然科学基金项目(No.811173603)3.江苏省科技支撑计划资金(社会发展)项目(No.BE2011738)4.江苏省自然科学基金面上项目(No.BK2012686)扬州大学
2、2014年5月扬州人学硕士论文南蛇藤提取物抑制人肝癌细胞HepG2转移的相关机制研究研究生:季雪导师:刘延庆教授中文摘要肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,手术切除是其首选治疗手段,但术后转移复发是制约远期疗效的重要因素之一。近年来研究发现,肿瘤转移是一个多步骤的复杂过程,包括肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移与粘附等。有许多信号转导通路参与了肿瘤细胞的转移过程的调控,磷脂酰肌醇3.激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol一3-kinase/ProteinKinaseB,P13K/Akt)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进
3、增殖的关键作用,与人类多种肿瘤的发生及发展密切相关。有文献表明P13眦信号通路可能通过促进肿瘤细胞内核转录因子rJ3(NuclearFactorKappaB,NF.1cB)、基质金属蛋白酶.2(MatrixMetalloproteinase一2,MMP一2)和基质金属蛋白酶.9(MatrixMetalloproteinase一9,MMP一9)的表达,进而促进肿瘤细胞的侵袭及迁移。南蛇藤(CelastrusorbiculatusThunb.)广泛分布于我国,功效祛风、除湿等。我课题组前期体内外研究发现,南蛇藤提取物(Celastrusorbiculatusextracts,COE)有显著的抗肿瘤
4、作用,但具体作用机制并不十分明确。本研究对COE体外抗人肝癌HepG2细胞的作用及相关机制进行了研究。目的:研究COE对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响,并进一步探讨相关分子机制。方法:不同浓度COE(20、40、80、160、320l-tg/mL)处理人肝癌HepG2细胞24h或48h后,MTT法分析COE对细胞增殖能力的影响;并在倒置显微镜下观察细胞形态变化;Transwell小室法检测各药物浓度对HepG2细胞的侵袭及迁移能力的影响;Westernblot法检测HepG2细胞P13K/Akt信号通路相关蛋白、NF.rJ3p65、MMP.2、MMP.9蛋白的表达水平。结果:不
5、同浓度COE作用24h后,20、40、80、160及320I_tg/mLCOE对HepG2细季雪:南蛇藤提取物抑制人肝癌HepG2细胞转移的相关机制研究胞增殖抑制率分别为11.74土2.95,12.594-3.16,19.594-3.02,51.94士7.30及58.564-11.83,与阴性对照组1.37士12.04相比,各组均有显著差异(P<0.05或P<0.01),药物作用48h后,20、40、80、160及320gg/mLCOE对HepG2细胞增殖抑制率分别为18.57-4-9.89,27.11士10.12,39.624-7.63,70.804-3.74及77.274-2.91,与对照
6、组1.994-13.68相比,各组均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。说明COE对HepG2细胞的增殖有抑制作用,并呈时间剂量依赖性。不同浓度20、40、80、160及320I.tg/mL的COE作用细胞48h后,倒置显微镜下观察各组细胞形态变化,结果显示,与对照组相比,COE药物组贴壁的细胞数目随着药物浓度的增加而减少,翅盥呈堡当塑圭氅垩碘:/药物作用24h后,Transwell小室法检测细胞侵袭结果表明,与阴性对照组相比,COE药物组能不同程度的降低细胞穿膜数目,有显著差异(P7、G2细胞数目随着COE药物剂量的增加而减少,与对照组1094-3.61相比,有显著差异(P<0.05或P<0.01)。综合上述结果,说明COE能抑制HepG2细胞的侵袭及迁移能力。加入不同浓度COE(20、40、80、160I.tg/mL)处理对数生长期HepG2细胞24h后,Westernblot分析,结果显示,与对照组相比,COE对Akt的表达影响不明显,但能明显抑制P—Akt、NF.rd3p
7、G2细胞数目随着COE药物剂量的增加而减少,与对照组1094-3.61相比,有显著差异(P<0.05或P<0.01)。综合上述结果,说明COE能抑制HepG2细胞的侵袭及迁移能力。加入不同浓度COE(20、40、80、160I.tg/mL)处理对数生长期HepG2细胞24h后,Westernblot分析,结果显示,与对照组相比,COE对Akt的表达影响不明显,但能明显抑制P—Akt、NF.rd3p
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