南蛇藤提取物抑制人肝癌细胞hepg2转移的相关机制研究

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1、季雪：南蛇藤提取物抑制人肝癌HepG2细胞转移的相关机制研究南蛇藤提取物抑制人肝癌细胞HepG2转移的相关机制研究MechanismsoftheCelastrusOrbiculatusExtractsInhibittheMetastasisinHumanHepatocarcinomaHepG2Cells研究生：季雪导师：刘延庆教授专业：中西医结合临床基金项目：1．国家自然科学基金项目(No．81274141)2．国家自然科学基金项目(No．811173603)3．江苏省科技支撑计划资金(社会发展)项目(No．BE2011738)4．江苏省自然科学基金面上项目(No．BK2012686)扬州大学

2、2014年5月扬州人学硕士论文南蛇藤提取物抑制人肝癌细胞HepG2转移的相关机制研究研究生：季雪导师：刘延庆教授中文摘要肝癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，手术切除是其首选治疗手段，但术后转移复发是制约远期疗效的重要因素之一。近年来研究发现，肿瘤转移是一个多步骤的复杂过程，包括肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移与粘附等。有许多信号转导通路参与了肿瘤细胞的转移过程的调控，磷脂酰肌醇3．激酶／蛋白激酶B(Phosphatidylinositol一3-kinase／ProteinKinaseB，P13K／Akt)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一，通过影响下游多种效应分子的活化，在细胞内发挥着抑制凋亡、促进

3、增殖的关键作用，与人类多种肿瘤的发生及发展密切相关。有文献表明P13眦信号通路可能通过促进肿瘤细胞内核转录因子rJ3(NuclearFactorKappaB，NF．1cB)、基质金属蛋白酶．2(MatrixMetalloproteinase一2，MMP一2)和基质金属蛋白酶．9(MatrixMetalloproteinase一9，MMP一9)的表达，进而促进肿瘤细胞的侵袭及迁移。南蛇藤(CelastrusorbiculatusThunb．)广泛分布于我国，功效祛风、除湿等。我课题组前期体内外研究发现，南蛇藤提取物(Celastrusorbiculatusextracts，COE)有显著的抗肿瘤

4、作用，但具体作用机制并不十分明确。本研究对COE体外抗人肝癌HepG2细胞的作用及相关机制进行了研究。目的：研究COE对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响，并进一步探讨相关分子机制。方法：不同浓度COE(20、40、80、160、320l-tg／mL)处理人肝癌HepG2细胞24h或48h后，MTT法分析COE对细胞增殖能力的影响；并在倒置显微镜下观察细胞形态变化；Transwell小室法检测各药物浓度对HepG2细胞的侵袭及迁移能力的影响；Westernblot法检测HepG2细胞P13K／Akt信号通路相关蛋白、NF．rJ3p65、MMP．2、MMP．9蛋白的表达水平。结果：不

5、同浓度COE作用24h后，20、40、80、160及320I_tg／mLCOE对HepG2细季雪：南蛇藤提取物抑制人肝癌HepG2细胞转移的相关机制研究胞增殖抑制率分别为11．74土2．95，12．594-3．16，19．594-3．02，51．94士7．30及58．564-11．83，与阴性对照组1．37士12．04相比，各组均有显著差异(P<0．05或P<0．01)，药物作用48h后，20、40、80、160及320gg／mLCOE对HepG2细胞增殖抑制率分别为18．57-4-9．89，27．11士10．12，39．624-7．63，70．804-3．74及77．274-2．91，与对照

6、组1．994-13．68相比，各组均有显著差异(P<0．05或P<0．01)。说明COE对HepG2细胞的增殖有抑制作用，并呈时间剂量依赖性。不同浓度20、40、80、160及320I．tg／mL的COE作用细胞48h后，倒置显微镜下观察各组细胞形态变化，结果显示，与对照组相比，COE药物组贴壁的细胞数目随着药物浓度的增加而减少，翅盥呈堡当塑圭氅垩碘：／药物作用24h后，Transwell小室法检测细胞侵袭结果表明，与阴性对照组相比，COE药物组能不同程度的降低细胞穿膜数目，有显著差异(P

7、G2细胞数目随着COE药物剂量的增加而减少，与对照组1094-3．61相比，有显著差异(P<0．05或P<0．01)。综合上述结果，说明COE能抑制HepG2细胞的侵袭及迁移能力。加入不同浓度COE(20、40、80、160I．tg／mL)处理对数生长期HepG2细胞24h后，Westernblot分析，结果显示，与对照组相比，COE对Akt的表达影响不明显，但能明显抑制P—Akt、NF．rd3p