中药蛇六谷提取物对人肝癌hepg2细胞增殖的抑制作用及其机理的初步研究

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1、ofextractsofwaterwereindistinctively.(2).TheextractofpetroleumetherandethylacetateofRhizomaAmorphophallihaveeffectontheproliferationofcellHepG2,withatime-effectcurve.(3).TheextractofpetroleumetherofRhizomaAmorphophallishowedthattheextracthaseffectofinduceapoptosisoftu

2、morcell.KeywordChineseherbaldrugs，AmorphophallusKonjac.K.Koch，hepaticcancer，cell proliferation，cellapoptosis万方数据前言恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病。近50年来，我国癌症的发病率一直处于上升阶段，癌症占居民死亡原因的19%，为常见死亡原因之首。根据世界卫生组织报告，2000年全球癌症死亡例数已超过700万，占全部死亡人数的12%，预期2020年每年新发病例数将达1500万。由于环境污染、生活习惯等因素影响，专家预计在20

3、25年前癌症总发病率不可能下降[1]。因此，癌症预防与治疗，将是一场长期战役。现代肿瘤的四大疗法为：手术、放射治疗、化学治疗及生物治疗[1]。前三者建立于19世纪末和20世纪初，生物治疗建立于20世纪80年代。四大疗法的出现在一定程度上为肿瘤患者带来了福音，但说要完全攻克癌症尚为时过早。但随着科学不断发展，不少新疗法、新药物逐渐面市，为肿瘤的彻底治愈带来了希望。近年来，从传统中药及复方制剂中提取活性成分和活性部位已成为发现抗肿瘤新药的一条重要途径。即运用“中药化学组学”（TCMChemics）[2]，将中药作用的物质基础用能代表其

4、功能的一组化学成分来诠释。目前，全球应用的抗肿瘤药物中已有一半左右的药物，其化学结构来自天然产物，如已开发出的目前临床广泛使用的提取成分紫杉醇、喜树碱等。我国有应用天然中草药的悠久历史，更积累了丰富的临床经验。因此，应用现代药物筛选方法开发高效低毒的天然中草药抗肿瘤有效部位与活性成分具有得天独厚的优势。蛇六谷，又名“魔芋”、“蒟蒻”、“翦头”、“由跋”等，最早收录于《神农本草经》，为天南星科魔芋属(Amorphophallus)多年生草本植物的块茎。据考证，浙江地区药用“蛇六谷”为AmorphophallusrivieriDuri

5、e[3]。现代医家认为其辛、寒、有毒，内服有化痰散积，行瘀消肿等功效[4]，《中药大辞典》记载它为一种常用的抗肿瘤中药。现代广泛用于治疗各种恶性肿瘤，有软坚散结、解毒抗癌作用，在肿瘤转移时，往往更重用该药。上海群力草药店曾总结70年来收方用药经验，发现在收集的118张治癌验方中，使用蛇六谷者占70%，其中脑转移、骨转移者使用率100%，并以君药出现。其它使用蛇六谷者以胆囊癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤为主[5]。故蛇六谷是江浙地区最有特色的常用抗癌中药之一。查阅60年代以来有关蛇六谷（魔芋）研究的国内外文献，蛇六谷（魔芋）抗

6、癌有效成分研究报道较少。魔芋块茎中主含魔芋精粉，其成分主要为葡甘露聚糖（KGM），此外还含有蛋白质、淀粉、果糖、蔗糖、葡萄糖和甘露糖等[4,6]。在报道的药理研究中，万方数据多以魔芋精粉或魔芋葡甘露聚糖为研究对象，认为其有抑癌、解除便秘、降脂、降糖、减肥等多种功效[7-9]。魔芋精粉为食品魔芋商品的原料，为鲜魔芋块茎削皮、切块、研粉后加工而成；葡甘露聚糖仅是蛇六谷的一种化学成分。而临床使用的蛇六谷为魔芋块茎的带皮饮片，其药理作用可能与魔芋精粉或葡甘露聚糖有一定差别[10、11]。因此，我们认为蛇六谷的抗癌有效成分值得深入研究。另外

7、蛇六谷的抗癌疗效原理及其主要作用靶点，也值得深入研究。本试验在前期研究的基础上，选择浙江地区治疗肿瘤常用药物——蛇六谷为具体研究对象，选取人肝癌HepG2细胞株为实验瘤株。拟以系统溶剂法初步提取分离蛇六谷的不同成分，以体外细胞实验方法筛选其活性部位，以生长曲线法观察其不同成分的时间－效应曲线，并从诱导肿瘤细胞凋亡角度探讨其抗肿瘤作用的可能机理，为进一步阐明该药作用的物质基础和机理提供科学的理论依据。万方数据实验研究一、材料与方法（一）实验材料1.实验室浙江中医药大学中药化学实验室浙江中医药大学分子生物与遗传研究室浙江省中医院中心实

8、验室2.实验细胞株人肝癌HepG2细胞株，购自中国科学院上海细胞生物学研究所。3.实验仪器SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵巩义市英谷予华仪器厂SENCOR-201旋转蒸发仪上海中顺生物科技有限公司AR2130电子精密天平美国Ohaus公司DGG-90