中药地椒乙醇提取物对人白血病细胞增殖的抑制作用

《中药地椒乙醇提取物对人白血病细胞增殖的抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中药地椒乙醇提取物对人白血病细胞增殖的抑制作用作者：孙震晓，张英慧，程霜，马清温，郭善利，张金保【关键词】乙醇提取物［摘要］目的：筛选中药地椒乙醇提取物的抗肿瘤活性成分，探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法：从野生地椒乙醇提取物中分离得到乙酸乙酯、正丁醇和丙酮3种萃取组分，以体外培养的人白血病细胞株K562和HL60作为研究对象。将各萃取组分与肿瘤细胞作用一定时间后，计数存活肿瘤细胞数，分析药物对肿瘤细胞生长曲线的影响，考察各组分对肿瘤细胞生长的抑制作用。以去甲斑蝥素作为阳性对照组，通过形态学分析等方法，研究中药地椒乙醇提取物可能的抗肿瘤作用机制。结果：中药

2、地椒乙酸乙酯萃取物对人白血病细胞株K562和HL60均有显著的抑制作用，且呈药物浓度依赖性，并可诱导肿瘤细胞凋亡；而正丁醇和丙酮萃取物对两种白血病细胞均无显著的抑制作用。结论：体外实验表明，乙酸乙酯萃取物是中药地椒乙醇提取物中主要的抗肿瘤活性成分。　　［关键词］地椒;乙醇提取物;乙酸乙酯萃取物;抗肿瘤药;K562;HL60　　　AntitumoreffectofethanolextractsfromThymusquinquecostatusCelakonhumanleukemiacellline　　ABSTRACTObjective:Toscreenth

3、eantitumorfractionofethanolextractsfromThymusquinquecostatusCelakandinvestigateitsantitumoreffectonhumanleukemiacellline.Methods:Ethylacetate,nbutanolandacetonefractionstheethanolextractsofusquinquecostatusCelak.GroanleukemiacelllinesK562andHL60inedbylivecellcountingandcellgroorm

4、echanismorphologicalanalysisajorantitumorfractioninethanolextractsfromThymusquinquecostatusCelak.　　KEYSO）配制成不同浓度的饱和药物溶液，分别为：乙酸乙酯萃取物10mg/ml、正丁醇萃取物20mg/ml和丙酮萃取物2mg/ml，置4℃保存。使用时用细胞培养液稀释100倍以上，使DMSO终浓度≤1%。（2）去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）由北京第四制药厂王广生教授惠赠，用RPMI1640培养液加热溶解，－20℃保存［7］。（3）小牛血清

5、为Hyclone公司产品。（4）青霉素、链霉素、庆大霉素、台盼蓝和Giemsa染液等为国产分析纯试剂。　　1.2体外培养人肿瘤细胞系及培养条件将人红白血病K562细胞和人早幼粒白血病HL60细胞（聊城大学细胞分子生物学重点实验室冻存）接种于含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃含5%CO2的培养箱内培养传代。所有实验均在细胞的对数生长期内进行。实验所用培养液均加入庆大霉素50μg/ml［8］。　　1.3台盼蓝染色活细胞计数法测定地椒乙醇提取物3种萃取组分对体外培养的人白血病细胞生长的抑制作用取处

6、于对数生长期的K562细胞和HL60细胞悬液分别接种在24孔细胞培养板（Costar公司产品）上，每孔加入2ml细胞悬液，每种细胞接种12个孔，分为6组，每组平行2个孔。第1、6组为空白对照组；第2组加入20μlDMSO，使其终浓度为1%；第3、4、5组分别加入20μl的丙酮萃取物、正丁醇萃取物和乙酸乙酯萃取物药物溶液，使其终浓度分别为20、200和100μg/ml。将24孔细胞培养板置于37℃含5%CO2的培养箱内培养，48h后取样，各孔均取90μl，加10μl4%台盼蓝染液，反应5min后，用血球计数板计数拒染细胞数作为活细胞数，15min内完成计数

7、［9］。每组有平行2个孔，取两孔的平均值。实验重复3次。　　1.4测定地椒乙酸乙酯萃取物对肿瘤细胞生长的抑制作用地椒乙酸乙酯萃取物冷冻干燥后，用DMSO溶解，配制成3种浓度，分别为10、1和0.1mg/ml。取处于对数生长期的K562细胞，用含10%小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和50μg/ml庆大霉素的RPMI1640培养液配制成浓度为5×104/ml的细胞悬液。将细胞接种在24孔细胞培养板上，每孔加2ml细胞悬液。24孔细胞培养板置于培养箱内培养24h，然后将24个孔分为6组，每组平行4个孔，其中3个孔用来取样计数，另1个孔用

8、来取样做Giemsa染色。第1组为空白对照组；第2组加入20μlDMSO，即1%