金花茶叶子提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制作用的研究.pdf

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1、·1382‘光明中医2014年7月第29卷第7期CJGMCMJuly2014．Vol29．7【实验研究】金花茶叶子提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制作用的研究何甘霖王春燕谭获郑丽霞于宝丹李宏伟摘要：目的观察金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制的作用。方法采用CCK_8(ce11CountingKit)试剂盒测量不同浓度的金花茶叶提取物刺激白血病细胞U937细胞24—72h，分5个时段，观察各浓度吸光度值(opticaldcnsitv，OD值)、对应增殖抑制率、最佳药效时间。结果CCK一8测试显示，800ug／ml浓度金花茶叶提取物刺激白血病细胞

2、株U937细胞36h、48h、60h、72h，与正常组细胞数比较，OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义(P<0．05)；当浓度为400ug／ml时，在48h、60h，OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义(P<0．O5)，表明最佳药效时间在48h一60h之间。结论高浓度的金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞有抑制作用。关键词：金花茶叶子；提取物；白血病；U937细胞doi：10．3969／j．issn．1003—8914．20l4．07．015文章编号：1003—8914(2014)．07．1382—03白血病是危害中国居民的主要恶性肿瘤之一⋯。东京，日本)

3、获得，培养于含有10％热灭活小牛血清抗白血病的药物呈明显的剂量与效应关系，但随着药的RPMI1640培养液中，37oC、5％CO2，饱和湿度条物剂量的增加，其毒性的发生率也明显提高，致使抗白件下培养。选取对数生长期细胞进行实验。血病的药物在临床中的应用受到了限制。因此，探索1．2方法疗效确切、副作用小、价格低廉的药物将是治疗白血病1．2．1体外细胞增殖抑制实验CCK一8试剂盒检测的重要研究方向。山茶属植物抗肿瘤活性的研究中发细胞生长情况，将U937细胞在37qC、5％CO2条件现，5％金花茶叶和5％的金花茶浓缩液有抑制DEN下，培养于无血清培养液中8h。细胞同步后离心，致大

4、鼠肝癌作用。金花茶种子乙醇提取物、正丁醇掉无血清培养液，再加入10％培养液(10％胎牛血清部分和水溶部分对U937细胞增殖均有抑制作用。+90％1640培养液)种于96孔培养板，每个孔细胞数本实验采用CCK一8试剂盒测量以金花茶叶提取物刺为3×l0，后加入等容量系列浓度的待测样品，每个激白血病细胞株U937细胞后的吸光度OD值、对应增浓度设6个平行孑L(6个副孔)。预实验设5个药物浓殖抑制率、最佳药效时问等。度组(800ug／ml，400ug／ml，200ug／ml，100ug／ml，50ug／1材料与方法m1)，分别于24h及72h测量数据。预实验后，因金花1．1材料CC

5、K一8试剂盒是由日本同仁化学研究所茶叶提取物水溶剂仍有细微颗粒，后续实验金花茶叶开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，试剂盒中采提取物予4％二甲基亚砜(DMSO)(4％DMSO+96％用该研究所开发的水溶性四唑盐一WST一8。试剂为瓶蒸馏水)溶解，为避免DMSO对白血病细胞U937的影装淡红色溶液，即开即用，不需要放射性同位素和有机响，加入DMSO组(5％DMSO对照组)。经初步筛选溶剂，具有检测快速，可以测定较低细胞密度，对细胞后确定共设5组，实验组药物的终浓度分别为毒性小等特性。800ug／ml，400ug／ml，200ug／ml，DMSO对照组加入相金花茶叶采集于广西

6、防城，由广西贵仁堂集团鉴同容积的DMSO对照组以及正常对照组，最终每孔细定提供。取金花茶叶粉碎后提取液，减压浓缩成浸胞个数为1．5×10，分别于培养24h，36h，48h，60h，膏，用DMSO配成各浓度溶液备用。72h测量数据。培养结束前2h每孑L加入IOIMCCK一8人单核细胞白血病细胞株U937从HumanSc—溶液(5mg／m1)，吸光度值与培养液中活细胞数成正iencesResearchResourceBank(日本人类科学基金会，比，所以通过吸光度值可以计算细胞存活百分率。1．2．2统计学处理所有数据应用SPSS17．0软件进行统计学分析。细胞增殖抑制率=(1一

7、实验组OD作者单位：1．广州医科大学附属第一医院肿瘤血液中心(广州510230)；2．广西防城桂人堂集团(防城港538000)值／对照组OD值)×100％。实验结果经“Kolmogorov—△通讯作者Smirnov”正态性检验及方差齐性检验，P值大于0．1，光明中医2014年7月第29卷第7期CJGMCMJuly2014．Vol29．7·1383·可认为各组近似正态分布并且符合方差齐性，用方差取物刺激白血病细胞U937，与正常组细胞数比较，24分析进行统计学分析，然后予LSD—t进行实验组和正小时仅800ug／ml