青蒿琥酯对人肝癌HEPG2细胞增殖作用的研究

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1、青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞增殖作用的研究【摘要】　　目的研究青蒿琥酯（Artesunate,Art）对肿瘤细胞增殖抑制作用。方法MTT法测定Art，与铁剂联用，以及与5-FU联用对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖抑制作用。结果Art能够明显抑制HEPG-2细胞的生长，并呈现明显的时间－剂量效应。24，48，72h的IC50值分别为103.1，75.3，65.7μg/m。当Art（10μg/ml)与5-氟尿嘧啶（5-Fu）（5μg/ml）联合使用时，表现出明显的协同作用。结论Art对人肝癌细胞系HEPG-2细胞有显著的

2、抑制作用，有可能开发为临床抗癌治疗的辅助药物。【关键词】青蒿琥酯HEPG-2　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofartesunate(Art)onHEPG-2cellsinvitro.MethodsCellculture,MTTwereperformedtoobservetheproliferationofArt,combiningwithiron,5-FU.ResultsArt（50～200μg/ml）couldinhibitHEPG-2cellproliferationinat

3、ime-dosedependentmannerandIC50were103.1,75.3,65.7μg/mlin24h,48h,72hrespectively.WhenArt(10μg/ml)wasusedcombiningwith5-Fu（2.5μg/ml）,therewasobvioussynergies.ConclusionArtcouldsignificantlyinhibittheproliferationofHEPG-2.7　　Keywords：Art;HEPG-2　　青蒿琥酯（artesunate，Art）

4、是从天然植物青蒿中提取的一种含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物,其结构具有一定的新颖性，临床上主要用于抗疟治疗。目前的研究发现，其还具有抗肿瘤效应［1，2］。本实验研究了Art对体外培养的人肝癌细胞系HEPG-2细胞增殖的影响。现报道如下。　　1器材　　1.1仪器　　全自动CO2孵箱(美国ThermoFormo)，倒置显微镜(日产)，雷勃MK3酶标仪。　　1.2试剂　　　　RPMI-1640培养液(美国Gibco公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；四唑盐(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司

5、；Art购于桂林制药厂；5-FU购于广西医科大学第一附属医院药剂科；硫酸亚铁为分析纯。7　　1.3细胞株和细胞培养人肝癌HEPG-2细胞株从广西医科大学肿瘤医院细胞室引进，培养在含10%小牛血清，含青链霉素各100u/ml的RPMI-1640培养液中，37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。　　2方法　　2.1MTT法检测细胞的增殖活性、青蒿琥酯IC50值的测定采用MTT法，取对数生长期的HEPG-2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，190μl接种于96孔培养板中，每组设6个复空，12h

6、贴壁后加入各组药物，药物终浓度梯度为200，100，50μg/ml，37℃，5%CO2饱和湿度下培养24，48，72h，OD值测量波长为双波长570nm/630nm，以下列公式计算抑制率：抑制率（%）=(1-加药组OD/对照组OD)×100%，实验重复3次。　　2.2Art与铁剂硫酸亚铁作用的研究取对数生长期的HEPG-2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，180μl接种于96孔培养板中，设置阴性组，Art组，Art与1，2μg/ml铁剂联合作用组，细胞12h贴壁后加入各浓度Art，以及终浓度分别为1，2μg/ml

7、的铁剂，检测方法同上。7　　2.3与抗癌药的协同作用研究取对数生长期的HEPG-2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，180μl接种于96孔培养板中，，设阴性组，5-Fu组，5-Fu与10，20μg/mlArt联合用药组,12h贴壁后加入各组药物，检测方法方法同上。　　3结果　　3.1Art的IC50值细胞每个浓度梯度的抑制率得出后，采用Bliss法求得Art对肝癌HEPG-2细胞的24，48，72h的IC50分别为(103.1±8.6)，(75.3±4.1)，(65.7±6.0)μg/ml。结果见表1。表1Art

8、各浓度的抑制率(略)100μg/ml浓度组和200μg/ml浓度组，与50μg/ml浓度组比较，P<0.05，有统计学意义；n=3　　3.2与硫酸亚铁联用结果Art终浓度为50，100，200μg/ml，分别与硫酸亚铁终浓度为1，2μg/ml联合作用，各联合组抑制率与单用Art组抑制率之间比较，P>0.0