青蒿琥酯对人肝癌hepg

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1、青蒿琥酯对人肝癌HEPG【关键词】青蒿琥酯HEPG-2　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofartesunate(Art)onHEPG-2cellsinvitro.MethodsCellculture,MTTedtoobservetheproliferationofArt,biningl）couldinhibitHEPG-2cellproliferationinatime-dosedependentmannerandIC50lin24h,48h,72hrespectively.K3酶标仪。　　1.2试剂　　　　RPMI-1

2、640培养液(美国Gibco公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；四唑盐(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司；Art购于桂林制药厂；5-FU购于广西医科大学第一附属医院药剂科；硫酸亚铁为分析纯。　　1.3细胞株和细胞培养人肝癌HEPG-2细胞株从广西医科大学肿瘤医院细胞室引进，培养在含10%小牛血清，含青链霉素各100u/ml的RPMI-1640培养液中，37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。　　2方法　　2.1MTT法检测细胞的增殖活性、青蒿琥酯IC50值的测定采用MTT法，取对数生长期的HEPG-

3、2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，190μl接种于96孔培养板中，每组设6个复空，12h贴壁后加入各组药物，药物终浓度梯度为200，100，50μg/ml，37℃，5%CO2饱和湿度下培养24，48，72h，OD值测量波长为双波长570nm/630nm，以下列公式计算抑制率：抑制率（%）=(1-加药组OD/对照组OD)×100%，实验重复3次。　　2.2Art与铁剂硫酸亚铁作用的研究取对数生长期的HEPG-2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，180μl接种于96孔培养板中，设置阴性组，Art组，Art与1，2μg/ml铁剂联合作用组，细胞12

4、h贴壁后加入各浓度Art，以及终浓度分别为1，2μg/ml的铁剂，检测方法同上。　　2.3与抗癌药的协同作用研究取对数生长期的HEPG-2细胞，按每孔细胞3×103～5×103个，180μl接种于96孔培养板中，，设阴性组，5-Fu组，5-Fu与10，20μg/mlArt联合用药组,12h贴壁后加入各组药物，检测方法方法同上。　　3.2与硫酸亚铁联用结果Art终浓度为50，100，200μg/ml，分别与硫酸亚铁终浓度为1，2μg/ml联合作用，各联合组抑制率与单用Art组抑制率之间比较，P>0.05，没有统计学意义。结果见表2。表2Art与硫酸亚铁联用

5、的抑制率(略)　　3.3与5-Fu联用结果Art终浓度为10，20μg/ml与5-Fu终浓度为2.5，5，10，20μg/ml联合作用，在5-Fu5μg/ml时加入Art10μg/ml或20μg/ml，与单用5-Fu比较，P<0.05有统计学意义。结果见表3。表3Art与5-FU联用的抑制率(略)　　4讨论　　Mosmann(1983)首先报道用MTT方法检测细胞活性，此方法简便、快速，所需细胞较少，目前已广泛用于临床前抗癌药物筛选研究［3］。本实验采用MTT法,求出Art各浓度对人肝癌细胞系HEPG-2的抑制率，且最高抑制率近80%，并有明显的时间－剂

6、量效应，采用Bliss法求得Art对肝癌HEPG-2的24，48，72h的IC50分别为(103.1±8.6)，(75.3±4.1)，(65.7±6.0)μg/ml。　　研究认为，青蒿素衍生物对肿瘤的细胞毒作用与其抗疟作用机理相似，由于疟原虫与肿瘤细胞具有一个共同特点：高铁浓度。而青蒿素结构中拥有独特过氧桥结构，且过氧桥结构为其药理活性所必须。实验证明，青蒿素类药物是在铁元素介导下，分子内过氧桥裂解产生活性自由基发挥作用，损伤机体细胞膜结构和烷化生物大分子，诱导肿瘤细胞凋亡，且其作用与细胞内铁离子水平成正相关［4］，如果使用全铁转铁蛋白可显著提高癌细胞内的Fe

7、2+更可以增加ART的抗肿瘤作用［5］。本实验发现，通过添加硫酸亚铁，其终浓度分别为1，2μg/ml未见提高Art对肿瘤细胞的抑制作用，其原因可能是对肿瘤细胞有一定的选择性。　　传统的抗癌药如5-Fu，环磷酰胺，阿霉素等毒副作用较大，且有不同程度的致突变毒性，病人常难以承受。因此，人们把目光转向中药，试图从天然植物成分中寻找毒副作用小，作用独特的抗癌药物。而Art具有化学结构独特，抗癌效果显著，毒副作用低，且不易产生耐药性等优点，因而与现有化疗药物联合使用，可能会取长补短，减毒增效，并提高肿瘤治疗的特异性。本实验对Art与5-Fu按不同比例联合使用的效果进行比

8、较，结果显示Art（10μg/ml)与