doxycycline抑制人肝癌细胞系hepg2生长的实验研究

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1、Doxycycline抑制人肝癌细胞系HepG2生长的实验研究作者：张强波　李杰　时昌文　李捷　孙京杰　曹莉莉【摘要】目的：观察多西环素（Doxycycline）对人肝细胞性肝癌细胞系HepG2生长抑制和凋亡的作用，并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度的Doxycycline（5、10、20、30和50mg/L）对体外培养人肝癌细胞系HepG2进行不同的时间干预（24、48和72h），MTT法测定细胞生长抑制率，TUNEL法检测细胞凋亡率，免疫细胞化学检测Fas、FasL及MMP-2蛋白表达的变化。结果：Doxycycline作用HepG2细胞48h和72h后，细胞生长被明显抑制，与无药对照组

2、比较差异有统计学意义（P<0.001），且呈时间、浓度依赖趋势。其细胞凋亡率较无药对照组也明显升高（P<0.01）；20mg/LDoxycycline作用于癌细胞48h后，实验组FasL蛋白阳性表达较无药对照组明显升高，MMP-2蛋白阳性表达较无药对照组明显降低，两组差异均有统计学意义（P<0.01），而Fas蛋白表达则差异无统计学意义（P>0.05）。结论：Doxycycline对人肝癌细胞系HepG2具有明显的生长抑制和促凋亡作用，其机制可能与下调MMP-2、上调FasL从而启动Fas/FasL膜受体途径有关。【关键词】肝肿瘤·Doxycycline·细胞凋亡·Fa

3、sL·MMP-210【ABSTRACT】Objective:ToobservetheeffectandmechanismofdoxycyclineoncellgrowthinhibitionandtheapoptosisofhumanhepatomacellHepG2invitro.Methods:HepG2cellsweretreatedwithdoxycyclineatdifferentconcentrationsandtimeinvitro.CellgrowthinhibitionratewasdetectedbyMTTassay,andapoptosisratewasidentifie

4、dbyTUNELassay,theexpressionofFas,FasLandMMP-2proteinswereexaminedbyimmunocytochemicalstaining.Results:Treatedwithdoxycyclineatdifferentconcentrations（5，10，20，30and50mg·L-1）for48and72hours,thegrowthofHepG2cellsdecreasedsignificantly（P<0.001）andtherewasatendencyofdose-timedependentmanner.IncubatedH

5、epG2cellswithdoxycyclineat20mg·L-1for48hours,theexpressionofFasLwereup-regulatedandMMP-2weredown-regulatedcomparedwiththoseofcontrolgroup（P<0.01）,whilethedifferenceofFasexpressionwasinsignificant（P>0.05）.Conclusion:DoxycyclinemightinhibitcellgrowthandinduceapoptosisofHepG2significantly.Themech

6、anismofdoxycyclineinducedapoptosismightbeassoci10　　多西环素（Doxycycline）为四环素类抗生素的一种，已有研究表明其对前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种肿瘤生长有明显的抑制作用［1-3］，而其对人肝癌细胞的生长抑制作用国内外未见报道。本研究观察了Doxycycline对人肝癌细胞系HepG2的生长抑制和凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。1　材料与方法1.1　实验材料　人肝细胞性肝癌细胞系HepG2购自美国典型物保藏中心细胞库，用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，37℃、5%CO2饱和湿度的孵箱内常规培养，每日倒置显微镜观察细胞生长情

7、况，3d换液，适时0.25%胰酶消化传代。四甲基偶氮唑盐（MTT）、DMSO和Doxycycline均购自Sigma公司，TUNEL凋亡检测试剂盒购自Roche公司，FasL兔多克隆抗体及MMP-2鼠单克隆抗体购自SANTCRUZ公司，Fas鼠单克隆抗体购自北京中山公司。1.2　方法1.2.1　MTT法检测肿瘤细胞生长能力　取对数生长期HepG2细胞，配成1.5×105mL-1的单细胞悬液，96孔