nmda受体nr2b亚单位参与炎症痛下丘脑弓状核中枢敏感化的机制研究

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1、苏州大学硕士学位论文NMDA受体NR2B亚单位参与炎症痛下丘脑弓状核中枢敏感化的机制研究姓名：徐龙生申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：蒋星红201104中文提要NMDA受体NR2B亚单位参与炎症痛下丘脑弓状核中枢敏感化的机制研究目的：本实验旨在研究外周炎症时下丘脑弓状核(hypothalamicarcuatenucleus，ARC)产生中枢敏感化的谷氨酸受体机制，重点探讨NMDA受体NR2B亚单位和Src蛋白酪氨酸激酶在其中的作用。方法：用完全弗氏佐剂(completeFreund’sadjuvant，CFA)建立大鼠外周炎症模型；用压爪．缩腿法和辐射热-缩腿法测定大鼠痛阈变

2、化；用电生理学方法进行细胞外记录离体下丘脑内侧基底部脑片ARC神经元的白发单位放电，并观察NMDA受体拮抗剂MK-801、NMDA受体NR2B亚单位拮抗剂R025．6981和Sre蛋白酪氨酸激酶拮抗剂PP2对自发放电的影响；用WesternBlot方法检测ARC区磷酸化的NRI(pNRl)、NR2B(pNR2B)、Src(pSrc)以及总NRl和NR2B蛋白的表达；用免疫共沉淀(co．immunoprecipitation)检测NR2B和pSrc的相互作用：观察ARC微量注射PP2后炎症大鼠痛阈变化和磷酸化NR2B的蛋白含量变化。结果：CFA炎症大鼠的痛阂明显低于正常大鼠(尸

3、)，表现为压爪机械缩腿阈值降低和辐射热缩腿潜伏期缩短，即出现痛觉过敏；外周CFA炎症时，ARC神经元自发放电频率明显高于正常大鼠(氏O．01)，表现神经元兴奋性增高；MK一801、R025．6981和PP2能部分翻转炎症大鼠ARC神经元的自发放电频率的升高；炎症大鼠ARC内Src蛋白酪氨酸激酶以及NMDA受体NR2B亚单位的磷酸化水平上调；免疫共沉淀显示，炎症大鼠ARC内pSrc和NR2B存在着相互作用；并且ARC内微量注射PP2后，NR2B的磷酸化水平下调，大鼠的痛阈也明显提高。结论：(1)外周CFA炎症时，ARC神经元的兴奋性提高，大鼠的痛阈下降，出现痛觉过敏；(2)中枢NMDA受

4、体及其NR2B亚单位参与炎症大鼠ARC神经元的兴奋性提高；(3)Src蛋白酪氨酸激酶通过激活NMDA受体NR2B亚单位的磷酸化，在炎症大鼠ARC中枢敏感化中发挥重要作用；(4)ARC作为脊髓以上水平调节痛觉的一个高位中枢，在外周炎症时产生中枢敏感化的机制之一，可能是炎症导致ARC中Src蛋白酪氨酸激酶激活，后者通过磷酸化NR2B亚单位来提高NMDA受体的敏感性，从而使ARC神经元兴奋性提高。NMDA受体NR2B亚单位塑兰壅壅塑I垦堕里鉴垫生塑篁壁垡堕垫型翌壅±壅塑壅关键词：下丘脑弓状核，痛觉过敏，NMDA磨体，NR2B亚单位，Src蛋白酪氨酸激酶，中枢敏感化。作者：徐龙生指导教师：蒋星

5、红教授英文提要NMDA受体NR2B亚单位参与炎症痛下丘脑弓状核中枢敏感化的机制研究T’：hanismoftheinvohrementofNIIemecilanevementolMDAreceptorNR2Bsubunit‘centraldtizationofhypothalamicincentralsensitizatlonityDothalamicarcuatenucleusfollowinginflammationpainAbstractObjective：Toexplorethemechanismsofcentralsensitizationofhyperalgesiaonsup

6、raLspillallevelbystudyingtheglutamatereceptorsignaltransductioninthehypothalamicarcuatenucleusfollowingperipheralinflammation，andtheroleofNR2BsubunitofNMDAreceptorandSrcproteintyrosinekinaseinthisphenomenon．Methods：Theperipheralinflammationmodelwasinducedbysub—plantarinjectionofcompleteFreund’Sa

7、djuvantinrats．Painthresholdwasmeasuredbymechanicalandthermalwithdrawalmethods．TheexperimentWasperformedonisolatedmediobasalhypothalamusslicetoobservethechanges．ofspontaneousdischargeofneuronsinarcuatenucleus．TheNMDAreceptora