tnfr12在脊髓背角调节nmda受体磷酸化参与痛敏过程的研究

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1、万方数据山西医科大学硕士学位论文单位代码：10114学号：20111030349TNFRl／2在脊髓背角调节NMDA受体磷酸化参与痛敏过程的研究研究申请学位门类级别：生理堂亟±研究方向：控经生堡所在学院：出酉医科太堂生堡堂丞2014年5月26日万方数据学位论文独创性声明IlIIHIIIIIIIIlltllllUlIIIIIIIIIUlIIIIY2660157本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均己做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上己属于他人的任何形式的研究成

2、果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：l、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：越日期：垃年—L月』一日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文

3、的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：指导教师签名：(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)26一＼Q一0一』巡啦警经麴缀万方数据山西医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OiImlim

4、lliBimi⋯⋯inlmllll⋯⋯⋯⋯⋯⋯4-6Abstract·一-·--··一----··--·--··-·-----··-··---···--·-····---·-·---·-··-·-···----··--·-·----··--·-·····-··7-10前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯liaiQiml⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯milimlll⋯⋯mmlioi⋯⋯11材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12—18结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯illllml⋯imllillB

5、Im⋯imio·mliml⋯19—28讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯olilmi⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ulllll⋯⋯⋯⋯⋯29—30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯iDIID⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3卜33综j盔⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ilmio⋯34—48刭【j射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lilIOI⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Qmilgll⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯493万方数据TNFRl／2在脊髓背角调节洲DA受体磷酸化参与痛敏过程的研究摘要传统的痛觉传导学说认为，疼痛是经外周，脊

6、髓和脑中三级神经元的传递，最终被机体感知的，常表现为不愉快的感觉或情绪体验。当持续性炎性痛发生时，神经系统中会有大量炎性介质产生，如IL一1B，TNF—Q等，这些炎性介质在痛敏的发生和维持过程中起着重要作用。TNF一0【是由神经元和胶质细胞分泌的炎性因子，在痛信号传入时表达增多，并参与痛敏及异常疼痛的发生和维持，但它通过何种方式介导了这一过程目前并不清楚。我们实验室的前期研究表明，TNF—Q可通过上调NMDA受体NRl亚基的磷酸化水平而增加痛敏的，但是TNFR有2种亚型，分别是TNFRl(55KD)和TNFR2(75K

7、D)，到底是哪种亚型介导了NRl的磷酸化还存在争论。本研究将利用siRNA技术分别沉默大鼠脊髓背角神经元TNFRl／TNFR2的表达，对TNFR介导上调pNRl的表达以及痛敏的发生机制进行更深入的研究。研究方法1．致痛模型制各及热痛行为观察雄性SD大鼠(250—2709)，一侧脚掌注射弗氏佐剂(CFA，0．08ml，40ug)或生理盐水(NS)。脚掌注射的时间设为0点；鞘内给药时间分别为脚掌注射前5天(一5d)；将动物置于热板仪上测量抬足缩回的潜伏期(PWL)的时间分别为脚掌注射后的第ld、3d和7d。实验分组按照2×

8、2双因素设计。2．Western-blot检测热板实验测量PWL结束后，快速处死动物，分离脊髓组织，在冰浴环境中用酶解缓冲液溶解，超声匀浆后离心，SDS-PAGE电泳分离蛋白，将蛋白转至PVDF膜上。经封闭、与一抗孵育、与相应二抗孵育后，检测免疫印迹。用该方法测定的指标有：TNFRl／TNFR2，pNRl。3．siRNA技术包装有