局灶性脑缺血后脑室下区nmda受体亚单位nr2b的表达变化

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1、局灶性脑缺血后脑室下区NMDA受体亚单位NR2B的表达变化【关键词】N-甲基-D-天冬氨酸受体；局灶性脑缺血；脑室下区Abstract:ObjectiveToinvestigatetheexpressionofNMDAreceptorsubunitNR2Binthesubventricularzone（SVZ）afterfocalcerebralischemia.Methods44maleSDratslyassignedto3groups:normalgroup,sham-operationgroupandischemia/

2、reperfusiongroup.Transientbrainischemia(90min)andreperfusioniddlecerebralarteryocclusion(MCAO).BrainsectionscutbyparaffinmethodmunohistochemicalreactionofNR2BbySPmethodandtoevaluatetheresultsageanalysissystem.ResultsSignificantincreaseofNR2Bpositivecellsmunoreactiv

3、ecellsreachedapeakon7d,andthenstartedtodecline.TheexpressionofNR2Bonthecontralateralsidechangedinamannersimilartothatontheischemiaside,butlessinamplitude.ConclusionThepresentresultsdemonstratethatthesharplyincreasedexpressionofNR2BintheSVZmightbeoneoftheeventsinvol

4、vedintheneurogenesisthere.Keyethyl-D-aspartatereceptor;focalcerebralischemia;subventricularzoneN-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体是哺乳动物中枢神经系统内谷氨酸受体之一，参与中枢神经系统许多重要的生理和病理过程［1-2］。NMDA受体现已发现并克隆的亚单位有NR1、NR2、NR3、NR4［3］。NR1为功能性亚单位；NR2伴随NR1存在于特定区域，增强NR1对兴奋性氨基酸的反应，可分为NR2A、NR2B、NR2C、NR2D，其中

5、NR2B亚单位最值得关注。NR2B不仅存在于神经元的突触上和突触外，在兴奋性突触传递［4］和神经元兴奋性毒性等方面起重要作用［5］；而且还存在于神经干细胞（NSCs）上［6］，影响中枢神经发生［7］。脑室下区是中枢神经系统重要的神经发生区，以往研究显示，离体培养的脑室下区神经前体细胞可对谷氨酸和NMDA的刺激作出反应［8］，但是在体SVZ区NMDA受体的表达影响因素鲜见报道。因此，本实验应用免疫组织化学方法初步观察了脑缺血对该区NR2B表达的影响，旨在探讨脑缺血与NR2B及脑室下区神经发生之间的关系，为研究该区NMDA受体与

6、神经发生的关系提供一定的理论依据。1材料和方法1.1实验动物及分组健康雄性SD大鼠，体重250～280g，由徐州医学院实验动物中心提供。将动物随机分为正常对照组（n=4）、假手术组和缺血/再灌注组，后2组动物进一步分为再灌注后3、7、14、21、28天5个时间点，每个时间点每组取4只动物。1.2大鼠大脑中动脉（MCA）缺血/再灌注模型制备采用大鼠大脑MCA阻塞再灌注模型（MCAO-R），参照Nagasam,栓塞90min后回抽出线栓约10mm，即可恢复MCA血供。手术过程中常规检测肛温，使肛温保持在(37.0±0.5)℃。大

7、鼠术后4h观察其行为学变化，按Longa评分标准［10］将动物的行为变化分为5级：0级——行为无明显变化；1级——左前肢屈曲，左后肢伸展；2级——有左侧追尾现象；3级——行走困难，摇摆不定；4级——意识不清。将1、2、3级动物定为模型成功大鼠，剔除0、4级大鼠。假手术组大鼠尼龙线插入深度为10mm左右，余同手术组。而正常组大鼠不作任何手术处理。1.3NR2B免疫组化反应（SP法）各组大鼠在相应时间点常规心内灌注，取脑，选取自前囟前1.2mm至前囟后0.3mm含侧脑室的组织块，石蜡包埋，切片，片厚6μm，每间隔3张取1张贴片，

8、进行免疫组化检测。常规脱蜡、复水；微波抗原修复：高火2min，低火15min，自然冷却至室温（注：用EDTA抗原修复液在抗原修复盒中进行）；3％H2O2，25min，室温；10％正常兔血清，37℃，1h（不洗）；滴加山羊抗大鼠NR2B抗体（1∶100，SantaCruz公司），4℃72h（