大鼠局灶性脑缺血activin a及其受体actrⅱa表达变化及意义

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1、大鼠局灶性脑缺血ActivinA及其受体ActRⅡA表达变化及意义作者：莽靖何金婷李宗树1胥桂华郭洪亮邵延坤徐忠信【摘要】目的探讨大鼠局灶性脑缺血激活素A(ActA)及其受体ⅡA(ActRⅡ)的表达变化规律及意义。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，采用光镜、免疫组化方法检测大鼠局灶性脑缺血后梗死体积、病理变化，免疫组化染色观察ActA、ActRⅡA免疫阳性表达。结果正常组织有极低水平的ActA、ActRⅡA表达，免疫组化显示缺血3h后在周边区ActA、ActRⅡA阳性细胞数量显著高于假手术组(P<0.05)，并随缺血时间延长而逐渐增高，于24h

2、达高峰。结论局灶脑缺血损伤可诱导内源性神经元ActA高表达，并可能通过特异性跨膜信号受体ActRⅡA发挥靶源性作用。【关键词】局灶脑缺血;激活素A;激活素受体　　【Abstract】ObjectiveToinvestigateexpressionofActivinAandActRⅡAinratafterfocalcerebralischemia.MethodsFocalcerebralischemiaanentmiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)intherat，injuryandinfarctionvolumeinbraintis

3、sueeasuredbyimmunohistochemistry.ResultsActivinAandActRⅡAprotEInexpressedataverylooperationgroup，astrongupregulationincorticalareasnexttotheinfarctiaandreachedacme24hafterMCAO.ConclusionsTheexpressionofActivinAandActRⅡAisgraduallyincreasedafterfocalcerebralischemia，ia;ActivinA;ActRⅡA　

4、激活素A(ActivinA，ActA)作为一种新近发现的内源性神经保护物质，正日益受到关注。ActA是转化生长因子β(TGFβ)超家族的成员之一，是由βA亚基通过二硫键连接而成的二聚体结构细胞因子〔1，2〕,具有广泛的生物学功能，但其在缺血性脑损伤中的表达变化及作用机制尚不明确。本实验采用大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，对ActA、ActRⅡA表达的动态变化规律进行了研究，探讨其在缺血性脑损伤中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物及分组成年健康雄性CAO模型组缺血3、6和24h，每组各6只。　　1.2MCAO模型大鼠评价采用神经功能缺损评分评估MCAO后

5、大鼠的神经损伤状况。HE染色苍白，神经细胞消失，核固缩，神经纤维网空泡化组织为梗死区，每张切片用图像分析检测、计算梗死面积。将每个鼠脑标本的所有含梗死灶组织块的梗死体积相加，为梗死体积值。　　1.3免疫组织化学方法检测ActA、ActRⅡA表达①在模型建立后3、6、24h，大鼠经10%水合氯醛深度麻醉后用含4%多聚甲醛的0.1mol/LPBS(pH7.4)进行灌注固定。取以视交叉为中心相当于前联合连续脑片继续固定4～6h，常规脱水、浸蜡、包埋。②采用SP法(ActA、ActRⅡA一抗、二抗及DAB试剂盒购自北京博奥森生物)。细胞浆、胞膜染成棕黄色为阳性细胞。③应用彩

6、色病理图像分析系统分析切片。所有切片均在同一光强度及放大倍数下进行，每张切片选取3个200倍镜下视野，计数阳性细胞数，以单个标本为单位，取平均值。　　1.4统计学分析数据以x±s表示，应用SPSS16.0软件进行方差分析。　　2结果　　2.1大鼠神经行为学评分及梗死体积测定模型组麻醉清醒后出现左前或左前后肢瘫，提尾悬空时左前肢内收腕屈曲，头向左侧背侧方扭曲，运动中出现向左转圈现象。假手术组无神经损伤体征。各组未见死亡大鼠。缺血3h模型组HE染色光镜观察可见明确梗死灶位于大脑中动脉供血区的皮质、皮质下白质和纹状体，随缺血时间延长梗死体积逐渐增大，24h达最高值;假手术

7、组未见明确梗死灶，见图1。　　2.2各组大鼠免疫组织化学染色结果假手术组见极少ActA、ActRⅡA阳性细胞表达;模型组随缺血时间延长，大脑中动脉供血区皮质、皮质下白质及纹状体ActA、ActRⅡA表达阳性细胞数增加，梗死周边区更明显，缺血24h达高峰(表1)，ActA表达以胞核为主，ActRⅡA以胞浆和胞膜为主(图2)。表1各组大鼠不同时间点ActA和ActRⅡA表达阳性细胞数与假手术组比较：1)P<0.01;与缺血3h模型组比较：2)P<0.05　　　3讨论　　缺血性脑血管病发病机制和有效防治方法一直是国内外研究的热点。在缺血性脑损伤之后，神经细