成纤维细胞生长因子诱导分子14在小细胞肺癌生长和多药耐药中的作用及其机制研究

《成纤维细胞生长因子诱导分子14在小细胞肺癌生长和多药耐药中的作用及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2011级硕士学位论文成纤维细胞生长因子诱导分子14在小细胞肺癌生长和多药耐药中的作用及其机制研究Fnl4isinvolvedincellgrowthandmulti-drugresistanceofsmallcelllungcancer课题来源：自选学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会成员李笑萍郭琳琅教授肿瘤学学术型硕士研究生第二临床医学院陈尊器教授张健教授张为民教授廖旺军教授张秀萍教授2014年3月30日广州硕士学位论文ⅢllillJlllllllJI

2、IIJPlllllllJJlJIJlllJIJJIIIY2618195Fnl4在小细胞肺癌生长和多药耐药中的作用及其机制研究硕士研究生：李笑萍指导教师：郭琳琅教授摘要研究背景肺癌是全世界最主要的恶性肿瘤之一，根据其病理类型可分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌。小细胞肺癌(SCLC)约占所有肺癌的15％左右，以细胞倍增时间短、肿瘤进展迅速、早期即可发生血液和淋巴转移为特点，是所有肺癌中恶性程度最高的肿瘤。尽管很多小细胞肺癌病人对放疗、化疗(顺铂、足叶乙甙、阿霉素)具有较好的早期反应性，但其极易发生多药

3、耐药性，导致肿瘤治疗失败、疾病进展和复发。小细胞肺癌多药耐药性产生的机制是一个很复杂问题，且是近年来小细胞肺癌临床治疗亟需解决的重要问题之一。成纤维细胞生长因子诱导分子14(Fnl4)基因，首次在鼠科动物内被称为生长因子诱导基因，是肿瘤坏死因子受体超家族中最小的成员，其分子量仅14kDA。Fnl4编码了一个细胞外含有一个胱胺酸区域以及细胞质内含有一个肿瘤坏死因子受体相关因子结合区域但缺乏胞质内死亡区域的I型跨膜蛋白。Fnl4在很多正常组织如肾、肺、胰腺等中的表达是低的，然而在肿瘤组织中Fnl4表达显著升高

4、，且有研究表明：Fnl4与神经胶质瘤、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、膀胱癌和非小细胞肺癌等肿瘤的疾病进展及不良预后密切相关，同时体内外实验均证明上调Fnl4的表达可以促进肿瘤的生长、侵袭和转移。这些结果表明Fnl4在肿瘤中充当致癌基因的作用。我们课题组前期工作表明Fnl4在小细胞肺癌耐药细胞株H69AR中的表达显著高于其在SCLC敏感细胞株H69中的表达，因此我们推测Fnl4可能参与了小细胞肺癌的生长和多药耐药性形成。研究表明NF．KB信号通路在肿瘤细胞增殖生长、血管生成、粘附以及侵袭摘要转移中发挥重要的作用，

5、同时也有证据表明上调Fnl4的表达可以激活NF．r,B信号通路，进而促进肿瘤细胞的生长。在胶质母细胞瘤、胃癌中，Fnl4通过激活NF．KB信号通路增加其下游存活因子Bcl．xl／w的表达，最终促进肿瘤的生长。因此我们推测NF．rd3信号通路可能参与了Fnl4调控小细胞肺癌生长和多药耐药的过程。为了进一步明确Fnl4在SCLC中的潜在生物功能，我们首先分析了Fnl4在SCLC组织、耐药细胞株和敏感细胞株中的表达，然后通过上调或下调Fnl4的表达研究了Fnl4对SCLC生长和多药耐药性的影响，最后我们还对Fn

6、l4调控SCLC生长及耐药性的机制进行了研究。结果发现1．Fnl4在SCLC组织中是高表达的且与肿瘤的不良预后有关，2．上调Fnl4的表达可以促进SCLC的生长及增加其耐药性，3．NF．rd3信号通路通过影响其下游靶基因Bcl．xl的表达，参与了Fnl4调控SCLC生长和耐药性的过程。结果表明Fnl4在调控小细胞肺癌生长和多药耐药性中起着重要的作用，有望成为小细胞肺癌临床治疗的潜在靶点。目的比较SCLC多药耐药细胞株(H69AR)和敏感细胞株(H69)中基因表达差异，选取显著表达差异基因Fnl4进行研究，

7、分析其对SCLC生长、耐药性的影响及其调控机制，同时选取了另一对细胞株(H446AR和H446)共同验证了Fnl4在调控SCLC生长、耐药性中作用，进一步丰富SCLC多药耐药性的分子机制，为临床治疗提供理论依据。内容与方法一、分析SCLC多药耐药细胞株H69AR和H446AR及敏感细胞株H69和H446中Fnl4基因表达的差异性。采用cDNA基因芯片技术分析SCLC多药耐药细胞株H69AR和敏感细胞株H69中具有差异表达的基因，选取显著表达差异的基因Fnl4进行研究，通过实时荧光定量PCR和Western

8、Blot技术分析Fnl4的mRNA和蛋白在耐药细胞株硕士学位论文(H69AR、H446AR)及其敏感细胞株(H69、H446)中的差异表达；二、Fnl4对小细胞肺癌增殖生长的影响。采用Fnl4表达质粒和shRNA增加或降低SCLC多药耐药细胞株(H69AR、H446AR)和敏感细胞株中(H69、H446)Fnl4表达水平，通过荧光定量PCR和WestemBlot技术验证转染效率。CCK．8及平板克隆实验分析了Fnl4对小细胞肺