上调pten基因表达对k562adm白血病细胞化疗增敏的实验研究

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1、分类号VDC硕士学位论文密级上调PTEN基因表达对K562／ADM白血病细胞化疗增敏的实验研究Up-·regulatedPTENexpressionincreasesthechemosensitiv“’K5一fADl。cell：iVltyin0Z／IVIcells量∞川作者姓名：张弘学科专业：儿科学学院(系、所)：湘雅医院指导老师：俞燕副教授论文答辩日期C二：!!答辩委员会主地V中南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含

2、为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：毯至丛日期：狴＆年』月量日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。1l1I作者签名：塑!：导师签名期：监年』月立日硕士学位论文中文摘要目的探讨上调人第10

3、号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基l园(phosphataseandtensinhomologuedeletedonchromosome10．PTEN)表达对白血病耐药细胞化疗增敏的机制。方法将PTEN真核表达质粒导入K562／ADM(阿霉素)细胞中，采用Westemblot和RT-PCR方法检测PTEN基因在转染前后的表达；MTT法检测ADM对转染前后K562／ADM细胞存活率的影响；应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率；采用重组人胱天蛋白酶．3(caspase．3)活性定量试剂盒分析caspase．3的活性；Westernblot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)一I／II、自噬相

4、关蛋白Beclinl、磷酸化蛋白激酶B(p—Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达；单丹磺酰戊二胺(加C)染色和透视电镜观察自噬泡的情况。结果①与未经处理和转染空载体的K562／ADM细胞相比，转染PTEN基因的K562／ADM细胞组PTENmRNA和蛋白水平均增高。②转染PTEN基因使K562／ADM细胞对ADM的药物敏感性增强。与转染空载体组比较，其细胞存活率从(94．07+2．61)％降低到(53．83士4．23)％，细胞凋亡率从(11．89士1．69)％增加到(43．69士2．30)％，P值均

5、26+3．42)％vs(94．07+2．61)％】、细胞凋亡率[(7．64士3．62)％VS(11．89士1．69)％]差异无统计学意义(尸>O．05)。经caspase．3抑制剂(Z．DEVE．FMK)预处理后，转染组细胞存活率[(74．1513．13)％]较未转染组[(97．4611．31)％】T硕士学位论文中文摘要及空载体组【(95。08+3．51)％】亦明显降低(P

6、一-0．13)和(3．15士O．08)]均明显高于转染空载体组【(1．19士0．14)和(1．48+0．06)】，P值均

7、DM，自噬，凋亡，耐药，基因转染ABSTRACTObjectiveToinvestigatethemechanismofreversalofchemoresistancetoADMonK562／ADMcellsbyup·regulatingPTENexpression．MethodsK562／ADMcellsweretransienttransfectedwithPTENoremptyvector．ThelevelofPTENinK562／AD