沉默chk1基因对人食管癌细胞化疗增敏作用的研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheeffectofChklgenesilencingonincreasingthechemotherapysensitivityofhumanesophagealcarcinomacellsBySunMiaomiaoSupervisor：Prof．ZhangMingzhiOncologytheFirstAffiliatedHospitalAugust2012原创性声明IIIIIlUl11111IY23130

2、89本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位敝作者：侬址醐：伽(伊Ⅲ莎日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关

3、数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。靴敝储：缈址嗍⋯萨f侦莎日摘要沉默chkl基因对人食管癌细胞化疗增敏作用的研究博士研究生：孙淼淼导师：张明智郑州大学第一附属医院肿瘤内科郑州450052我国食管癌的发病率居世界首位，而河南省太行山区又是我国食管癌的高发地区。其具有侵袭性强、进展迅速、易复发且死亡率高等特点。目前，食管癌的治疗方法主要包括手术切除、化疗、放疗以及生物治疗等，其中化疗是治

4、疗中晚期食管癌患者的主要手段之一。但在临床治疗过程中许多患者出现化疗抵抗，其原因主要是因为常规化疗药物可以激活肿瘤细胞周期检测点，从而通过相关信号传导通路，使受损DNA的自我修复，从而逃避凋亡。细胞周期检测点的激活是一种细胞的自我保护机制。当细胞受到化疗等因素损伤后，可激活多个DNA损伤周期检测点(G1／S、S、G2／M)，将受损的细胞停滞于相应的检测点DNA修复，从而避免过多的细胞产生凋亡。在细胞周期检测点信号传导通路中细胞周期检测点激酶1(checkpointkinase1，Chkl)起着重要作用。Chkl是细胞周期检测点最重要的丝氨酸／苏氨酸激

5、酶，主要参与G2／M期细胞周期检测点信号传导。Chkl可能是迄今最合适消除G2期阻滞的靶分子。目前国内外学者主要采用ChklsiRNA及反义寡核苷酸技术沉默肿瘤细胞中Chkl表达，达到增强恶性肿瘤细胞放疗敏感性的目的。有关通过沉默Chkl达到增强恶性肿瘤细胞化疗敏感性的报道甚少，通过沉默Chkl达到增强食管癌细胞化疗敏感性的研究尚未见报道。顺铂是目前恶性肿瘤化疗的基本药物之一。然而大量的临床研究发现，含铂类药物的联合化疗方案的临床有效率明显降低，主要原因是由铂类引发的多药耐药即化疗抵抗，这也成为制约晚期恶性肿瘤临床治疗得主要原因。目前大量研究发现，常

6、规化疗药物可造成肿瘤细胞不同类型的DNA损伤，进而激活DNA摘要损伤检测点，促进肿瘤细胞DNA损伤修复，从而使细胞逃避凋亡。因此，DNA损伤检测点的功能状态在一定程度上决定了化疗的疗效好坏。本研究拟通过ChklsiRNA沉默食管癌细胞中Chkl的表达，体内外观察Chkl基因沉默后顺铂对食管癌化疗敏感性的影响，为临床增强食管癌等恶性肿瘤化疗敏感性奠定理论基础。本研究共分以下4个部分。第一部分Chkl在食管鳞癌组织中的表达及其意义方法1．采用免疫组织化学、Westernblot、原位杂交、RT．PCR等技术分别检测食管鳞癌组织(62例)、癌旁不典型增生组

7、织(31例)及正常食管黏膜组织(62例)中Clll(1蛋白及mRNA的表达情况。2．统计学方法：应用SPSSl3．0软件进行数据处理。采用贮检验、t检验和方差分析，并利用Spearman进行相关性分析。检验水准a=0．05。结果1．Chkl蛋白阳性表达主要定位于食管癌细胞的胞核及胞质内，呈棕黄色颗粒；ChklmRNA阳性表达定位于食管癌细胞的胞质内，呈蓝紫色颗粒；二者在癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织内阴性表达或低表达。2．免疫组化、Westernblot及原位杂交、RT．PCR联合检测结果显示：在正常食管黏膜、癌旁不典型增生和食管鳞癌组织中，C

8、hkl蛋白的阳性表达率依次升高，三者间两两相比差异均有统计学意义(P