三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究

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1、三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究【摘要】目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用及其机制。方法用流式细胞仪检测As2O3联合5－氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素作用下胆囊癌细胞凋亡情况。用ethodsFloetricinetheapoptosisofGBCcellsconductedbyAs2O3binedycinandAdriamycin.itomycinandAdriamycinotherapyofgallbladdercarcinomaviaup-ordoacells;chemotherapy;apop

2、tosis胆囊癌约占腹部恶性肿瘤的第5位，由于缺乏特异性的临床表现，早期诊断困难，待确诊时多属晚期，手术切除率较低。常规化疗药物对胆囊癌的效果较差，需要寻找治疗胆囊癌新的有效药物。三氧化二砷（As2O3）在治疗急性早幼粒细胞白血病取得了突破性成果［1］，国内外的研究也发现，As2O3可诱导多种肿瘤细胞、包括胆囊癌细胞的凋亡［2～4］。本研究探讨As2O3对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用，并对相关机制做初步研究。1材料和方法1.1细胞和主要试剂As2O3购自Sigma公司，用生理盐水1mmol/L的储存液，使用前用完全培养基稀释到所需浓度。抗

3、Cleaved-Caspase-3、Bcl-2和PARP等的抗体购自CellSignal。抗GAPDH的抗体购自SantaCruzBiotechnology。抗HA的抗体购自RocheAppliedScience。人胆囊癌细胞GBC购自中科院细胞所。发光试剂购自AmershamPharmaciaBiotech。1.2细胞培养GBC细胞接种在含10％小牛血清的DMEM培养液中，在温度37℃、5％CO2的培养箱中。取对数生长期的细胞，接种在含10％小牛血清的DMEM培养液中，每孔2×105接种于96孔板、温度37℃、5％CO2的培养箱中。24h

4、后分别加入5-氟尿嘧啶（50mmol/L）、阿霉素（10mmol/L）、丝裂霉素（4μmol/L）及1mmol/LAs2O3连续培养24h，检测细胞凋亡情况。1.3流式细胞仪检测收集1×107个细胞，800g离心10min，0.01mmol/LPBS洗涤1次，用70％冷乙醇固定18h，再用PBS洗去固定液，加碘化丙啶染色液1ml（20μg/mlPI）,终浓度为50mg/ml，置入4℃冰箱30min后用流式细胞仪检测细胞凋亡。1.4WesternBlot分析提取细胞总蛋白，BCAProteinAssayKit定量，80μg蛋白用10％SDS-

5、PAGE分离，转膜，封闭后。加入一抗，二抗，并显色。2结果2.1As2O3诱导对胆囊癌GBC细胞的化疗增敏作用胆囊癌GBC细胞培养24h后分别加入5-氟尿嘧啶（50mmol/L）、阿霉素（10mmol/L）、丝裂霉素（4μmol/L）及1mmol/LAs2O3，连续培养24h后检测细胞凋亡发现：As2O3作用下胆囊癌细胞凋亡率明显上升，同时，在As2O3的协同作用下，各化疗药对胆囊癌细胞的诱导凋亡作用明显增强，As2O3增强了每种化疗药物对胆囊癌细胞的诱导凋亡作用（见图1）。2.2olMed,2000,5（2）:155-158.4艾志龙,陆

6、维琪,秦新裕.三氧化二砷诱导人胆囊癌GBC细胞凋亡及其机制研究.中国癌症杂志,2006,16（5）:379-382.5艾志龙,童赛雄,陆维琪,等.三氧化二砷抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长及促凋亡作用.中国癌症杂志,2007,17（9）:689-691.6AiZhilong,Luacellapoptosisviado.