姜黄素对人鼻咽癌细胞放射增敏作用及其机制研究

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1、南方医科大学2011级博士学位论文姜黄素对人鼻咽癌细胞放射增敏作用及其机制研究Studyonradiosensitizationef-fectofcurcuminonhumannasopharyngealnasopha巧ngealcarcinomaceU课题来源：国家自然科学基金面上项目(81173616)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员论文评阅人世曰—■；巳天-丁佟丽研究员范钦副研究员中药学学术型博士中医药学院王汝俊教授李卫东教授余林中教授覃仁安高级工程师佟丽研究员范钦副研究员2014年3月28日广州博士学位论文姜黄素对人

2、鼻咽癌细胞放射增敏作用及博粼怒宁～煳螋一博士研究生：范吴宁～～二二二二!!!一指导教师：佟丽研究员范钦副研究员摘要研究背景与目的鼻咽癌(nasopha巧ngealcarCilloma，NPC)是我国常见的恶性肿瘤之一，占全国恶性肿瘤死亡的2．81％。据WHO估算，中国NPC发病占全世界80％以上，其中又以中国南方地区发病率为最高，如广东、广西、湖南等省，特别是广东珠江三角洲和西江流域发病率最高，高发区发病率15～30／10万人口，死亡率18．46／lO万人口。在治疗上，目前以放射治疗为主，放射治疗后鼻咽癌的平均5年生存率为50％．60％。但鼻咽癌早期症状并不明显，70％

3、患者确诊时已属晚期，而晚期鼻咽癌(IⅡ、Ⅳ)的5年生存率更低，约10％．40％，治疗失败的主要原因是局部复发和远处转移。作为一种剂量依赖型肿瘤，治疗过程中通过提高局部放射剂量可提高鼻咽癌的局部控制率及生存率，但由于接受放射治疗患者会出现放射反应，特别是急性放射反应，明显影响了患者的生活质量和放射治疗的进程，给患者造成极大的损害和痛苦。因此，寻找有效的放射增敏药物对于预防放射副反应具有重要意义。目前常用的放射增敏剂有5．氟尿嘧啶和顺铂，其在杀死肿瘤细胞的同时也对正常的组织细胞产生了毒性作用，从而限制了其在临床上的应用。为了提高鼻咽癌患者的总的生存率，寻找一种安全低毒的放射

4、增敏药物并阐明其增敏机制，具有重要的临床价值和科学意义。姜黄素(Curcumin，Cur)是从姜科姜黄属植物中提取的一种多酚类化合物，临床前研究以及I期临床研究表明姜黄素具有广泛的药理活性：具有抗细胞增殖、抗肿瘤血管生成等作用，可以调节机体的抗药性和耐辐射性，促进伤口愈合，并对糖尿病、阿尔茨海默病、帕金森病、心血管疾病、肺部疾病以及关节病有显著的治疗效果。既往研究表明，姜黄素既具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞摘要凋亡的作用，同时也具有肿瘤放射增敏效应，但姜黄素对鼻咽癌的增敏作用及其机制尚不清楚。鉴于此，本课题拟对姜黄素的放射增敏作用及其机制进行研究。国内外研究证实多药

5、耐药基因1(multidmgresistallcegene1，MDRl)与放射敏感性密切相关。宋鹏等证实照射使体外培养的肿瘤细胞的MDRl111][斟A表达增强，并对放疗也产生了耐受，表明过表达MDRl使细胞获得放射抵抗性。MDRl的表达受多种因素调控，而111icroI斟A靶向参与MDRl表达调控的研究未见报道。前期研究中，我们证实111icmI矾A可调控MDRl表达。因此，本项目通过体内和体外实验，在证实姜黄素对鼻咽癌是否具有放射增敏作用的基础上，进一步研究MDRl等相关蛋白的表达，探讨microI矾A靶向调控MDRl及其参与鼻咽癌放射增敏的可能性。长链非编码RNA

6、(1ncRNA)是指转录本长度大于200nt(叫cleotide)且不翻译成蛋白质的功能性RNA分子。1ncI矾A能够影响特定基因座编码的靶蛋白的表达，调节蛋白结合因子的活性，引导染色质修饰复合物的定位以发挥其作用，并且能够通过转录后加工产生大量具有5’帽子结构的小RNA。近年来研究表明，1ncRNA与许多癌症的发生和发展密切相关，如膀胱癌、乳腺癌、肝癌和前列腺癌等。前期研究中我们发现给予姜黄素处理后，部分1ncINA的表达发生变化。那么在鼻咽癌中，是否有1ncRNA的参与及其作用机制，是我们本研究中拟解决的问题。研究内容与方法1．姜黄素对人鼻咽癌CNE．2细胞增殖的抑

7、制作用采用体外培养的人鼻咽癌CNE．2细胞，以MTT法检测姜黄素对CNE．2细胞的细胞毒作用。将不同浓度的姜黄素分别加入到CNE．2细胞培养液，其终浓度分别为5，10，20，40uM，并设立溶剂对照组。加药后分别培养24h和48h，检测吸光度(OD值)，并根据存活分数计算出半数抑制浓度。2．克隆形成实验检测姜黄素对CNE．2细胞放射增敏作用实验分为照射组和照射+姜黄素组，胰酶消化细胞后制成单细胞悬液，逐级稀释后以适当密度接种于6孔板中，完全培养液中培养10．14天，待形成明显的细胞集落时甲醇固定30111in，PBS清洗后姬姆萨染色10m