大黄素对乏氧鼻咽癌细胞的放射增敏性与dna修复基因的关系

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1、万方数据中国药理学通报ChinesePMrmacolo#ca!Bulletin2009Mar；25(3)：348—52大黄素对乏氧鼻咽癌细胞的放射增敏性与DNA修复基因的关系刘瑛，侯华新，黎丹戎，程道海，罗艳(广西医科大学药学院药物分析教研室，广西南宁530021)中国图书分类号：R284．1；R342．22；R342．3；R394．2；R734．630．22；R979．1文献标识码：A文章编号：1001—1978(2009)03—0348—05摘要：目的研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE．1细

2、胞KU70／80表达的影响，探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系。方法通氮乏氧条件下，应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF．1a)和DNA双链断裂修复基因(KU70／KU80)mRNA的表达水平。结果乏氧作用不同时间后HIF．1amRNA表达都明显升高，而单独药物组HIF．1a表达无明显变化；单纯放疗组能诱导KU70／KU80mRNA表达上调，放疗联合乏氧组对KU70／KU80的上调作用比单纯放疗组更明显；而在乏氧情况下进行加药和照射处理后KU70／KU80mRNA表达

3、明显降低。结论在乏氧环境下，大黄素联合放疗能有效下调HIF·la和DNA双链断裂修复基因(KU70／KUSO)mRNA的表达水平，这可能是其增敏作用的分子机制。关键词：大黄素；乏氧；修复基因；实时荧光定量RT·PCR；鼻咽癌鼻咽癌是广西的高发肿瘤，临床上90％的患者需要进行放射治疗，但由于肿瘤细胞在体内处于一个特殊的缺氧微环境，造成对射线不敏感或抗拒，导致了放疗效果往往达不到人们期待值，所以，研究鼻咽癌的放射抗拒机制，寻找高效的放射增敏剂成为当今鼻咽癌放射生物学的重点和热点。大量证据表明，乏氧能诱导DNA修复基因的表达，

4、提高照射后DNA双链断裂修复的能力，这与肿瘤的放射抗拒性密切相关。大黄素是从广西特色中药何首乌中提取出的有效成分，本课题组前期研究已经发现该成分收稿日期：2008—10—05，修回日期：2008一12一13基金项目：国家自然科学基金资助项目(No30660047)；广西自然科学基金资助项目(No0728112)；广西研究生教育创新计划(No2007105981007M09)；广西大型仪器协作共用网资助项目(No507-2007-086)作者简介：刘瑛(1982一)，女，硕士生，研究方向：药理学，Tel：0771-5334

5、336．E·mail：shenghuakai～1997@163．删Ⅱ；侯华新(1960一)，男，教授，硕士生导师，研究方向：天然产物分子药理学，通讯作者，Tel：0771-5334336，E-marl：houhuaxin@163．咖对鼻咽癌有良好的放射增敏作用，本实验拟采用体外乏氧细胞模型，通过实时荧光定量PCR方法检测大黄素对乏氧状态下鼻咽癌CNE—l细胞的乏氧诱导因子(HtF．1a)和DNA修复基因的影响，从而探讨其放射增敏作用机制，为药物的靶点研究提供理论基础。1材料与方法1．1材料1．1．1药物大黄素(纯度>98

6、％)由本课题组前期从广西何首乌中分离提取获得，为黄色粉末，其化学结构如Fig1所示，理化性质与文献报道⋯一致。用无水乙醇溶解后配成1．2g·L。1的储备液，实验中在含有10IIll培养基的细胞内加人大黄素储备液使其终浓度为3．9mg·L～，乙醇终浓度为0．325％。lHO．OOHHOOFig1Thestruetnralfomulaeofemodin1．1．2细胞来源人鼻咽癌细胞高分化系CNE．1由广西医科大学实验中心提供。1．1．3主要试剂和仪器TRIzolREAGENT(In．vitrogen公司，美国)、M-MLV逆

7、转录酶(Fermentas公司，美国)、PCR试剂(TaKaRa公司，日本)、SYBRGREENI染料(Generay公司，中国)、超低温高速离心机(Eppendorf公司，德国)、iCycler荧光定量PCR仪(Bio—Rad公司，美国)。采用∞Co射线(加拿大Theratronies产品)为照射源，剂量率94．41cGy·min～，根据实验要求进行相应剂量的照射。1．1．4引物序列根据Genebank人类各目的基因cDNA序列，引物用Primer5软件自行设计，由上海生物工程技术有限公司合成，其引物序列及产物大小见T

8、ab1。万方数据中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2009Mar；25(3)·349·HIF．1a5’一AGCCGCTGGAGACACAAT-3’5’．TCGGAAGGACTAG(玎G伽A-3’302KU705’．CAAGGGTACGCTC,Cf∞AAGll℃Ac．3’5’．T