多烯紫杉醇对人食管癌细胞的放射增敏作用及其机制的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文多烯紫杉醇对人食管癌细胞的放射增敏作用及其机制的实验研究姓名：何丽申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：祝淑钗201203中文摘要多烯紫杉醇对人食管癌细胞的放射增敏作用及其机制的实验研究摘要目的：通过观察多烯紫杉醇对人食管癌ECAl09和TE．13细胞增殖、细胞周期分布、凋亡率及相关蛋白表达的影响，探讨多烯紫杉醇对人食管癌细胞放射增敏的作用机制，为临床应用提供理论依据。方法：1体外培养人食管癌ECAl09和TE．13细胞，采用MTT法测定不同浓度(0、O．1、0．5、l、5、10、50、10

2、0nM)多烯紫杉醇作用细胞24h、48h、72h后的增殖情况，绘制细胞生长曲线，筛选出低细胞毒性药物浓度进行后续实验。2采用克隆形成实验检测lnM和0．5nM的多烯紫杉醇对食管癌ECAl09和TE．13细胞的放射增敏作用。3将ECAl09、TE．13两株细胞分别设为空白对照组、单纯照射组(4Gy照射)、单纯药物组(1nM和0．5nM多烯紫杉醇)、药物加照射组(1nM和O．5nM多烯紫杉醇加4Gy照射)，采用流式细胞技术测定不同处理后24h、48h、72h各组细胞周期分布及凋亡率的情况。4采用westernblotti

3、ng技术检测lnM多烯紫杉醇对食管癌ECAl09细胞照射后24h，p21、bax、bcl．2蛋白表达的影响。结果：1MTT结果显示：不同浓度多烯紫杉醇(O、O．1、O．5、1、5、10、50、100nM)作用食管癌ECAl09和TE．13细胞24h后，与对照组比较，各处理组OD值下降均不明显俨>0．05)；作用细胞48h、72h后，各处理组细胞OD值较对照组均显著下降，差异具有统计学意义(尸

4、nM分别作为ECAl09和TE．13细胞后续实验药物浓度。2克隆形成实验结果显示食管癌ECAl09和TE．13细胞的接种效率分别为82．7％和71．7％；ECAl09及TE．13细胞的Do值和SF2值分别为3．00Gy中文摘要和0．95、2．41Gy和0．93。ECAl09的多烯紫杉醇(1nM)联合照射组Do值和SF2值分别为2．54Gy和0．88，TE．13的多烯紫杉醇(0．5nM)联合照射组Do值和SF2值分别2．31Gy和0．90。3流式细胞技术检测细胞周期结果显示：正常情况下大部分细胞处于Go／Gl期，其次是

5、S期，G2／M期比例最少。给予ECAl09和TE—13细胞单纯药物、单纯照射、药物加照射处理后12h、24h、48h均引起细胞G2／M期比例的增加和Go／Gl期比例的下降。单纯药物作用细胞后，G2／M期比例的增加和Go／Gl期比例的下降较早，并于12h时变化最明显，而后逐渐恢复，至48h与空白对照组未见明显差别(．P>O．05)；4Gy照射细胞后，细胞也表现为G2／M期比例的增加和Go／G1期比例的下降，但较单纯药物组变化较晚，且恢复也较慢，48h时仍未恢复至正常(．氏0．05)；12h、24h、48h时，药物加照射

6、组的Go／Gl期比例较单纯药物组和单纯照射组显著下降(P<0．05)，G2／IVI期比例则较单纯药物组和单纯照射组显著增加(尸0．05)，单纯药物组和药物加照射组的凋亡指数明显增加(P

7、3细胞单纯药物、单纯照射、药物加照射处理后12h、24h、48h，与空白对照组比较，单纯照射组凋亡指数在各时间点均未见明显变化(胗0．05)，单纯药物组和药物加照射组的凋亡指数在各时间点均明显增加，差异具有统计学意义俨

8、于单纯药物组和单纯照射组(尸<0．05)，单纯药物组与单纯照射组之间p21的蛋白表达量未见明显统计学差异(胗O．05)；单纯照射组、单纯药物组和药物加照射组的bax蛋白表达水平均高于空白对照组，且差别具有统计学意义(P<0．05)，药物加照射组显著高于单纯药物组和单纯照射组(P<0．05)，单纯药物组高于单纯照射组(尸