三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究

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1、三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究【摘要】目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用及其机制。方法用流式细胞仪检测As2O3联合5－氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素作用下胆囊癌细胞凋亡情况。用Westernblot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和PARP的表达。结果在As2O3的协同作用下，5－氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素对胆囊癌GBC细胞的诱导凋亡作用得到增强；蛋白水平的检测表明Caspase-3和PARP的剪切上升，而Bcl-2的蛋白表达下降。结论As2O3具备对胆囊癌细胞化疗增敏潜能，并主要通过改变Caspase-

2、3、PARP及Bcl-2等的表达来实现。【关键词】三氧化二砷；胆囊癌细胞；化疗；细胞凋亡EnhancedeffectofArsenictrioxideonchemotherapyofgallbladdercarcinomaanditsmechanism［Abstract］ObjectiveTostudytheenhancedeffectofAs2O3onthechemotherapyofgallbladdercarcinomacellanditsmechanism.MethodsFlowcytometricwasusedtodeterminetheapoptos

3、isofGBCcellsconductedbyAs2O3combinedwith5-Fu,MitomycinandAdriamycin.Westernblotwasperformedto6analysisapoptoticproteinsexpressionofCaspase-3,PARPandBcl-2.ResultsTheapoptoticactivityof5-Fu,MitomycinandAdriamycinwereenhancedbyAs2O3.TheproteinsexpressionofCaspase-3,PARPwereup-regulated,

4、howere,thatofBcl-2wasdown-regulated.ConclusionAs2O3couldplayapotentialroletothechemotherapyofgallbladdercarcinomaviaup-ordown-regulationoftheexpressionofapoptoticrelevantprotein.［Keywords］arsenictrioxide;gallbladdercarcinomacells;chemotherapy;apoptosis胆囊癌约占腹部恶性肿瘤的第5位，由于缺乏特异性的临床表现，早期诊

5、断困难，待确诊时多属晚期，手术切除率较低。常规化疗药物对胆囊癌的效果较差，需要寻找治疗胆囊癌新的有效药物。三氧化二砷（As2O3）在治疗急性早幼粒细胞白血病取得了突破性成果［1］，国内外的研究也发现，As2O3可诱导多种肿瘤细胞、包括胆囊癌细胞的凋亡［2～4］。本研究探讨As2O3对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用，并对相关机制做初步研究。1材料和方法1.1细胞和主要试剂As2O3购自Sigma公司，用生理盐水16mmol/L的储存液，使用前用完全培养基稀释到所需浓度。抗Cleaved-Caspase-3、Bcl-2和PARP等的抗体购自CellSignal。抗G

6、APDH的抗体购自SantaCruzBiotechnology。抗HA的抗体购自RocheAppliedScience。人胆囊癌细胞GBC购自中科院细胞所。发光试剂购自AmershamPharmaciaBiotech。1.2细胞培养GBC细胞接种在含10％小牛血清的DMEM培养液中，在温度37℃、5％CO2的培养箱中。取对数生长期的细胞，接种在含10％小牛血清的DMEM培养液中，每孔2×105接种于96孔板、温度37℃、5％CO2的培养箱中。24h后分别加入5-氟尿嘧啶（50mmol/L）、阿霉素（10mmol/L）、丝裂霉素（4μmol/L）及1mmol/LA

7、s2O3连续培养24h，检测细胞凋亡情况。1.3流式细胞仪检测收集1×107个细胞，800g离心10min，0.01mmol/LPBS洗涤1次，用70％冷乙醇固定18h，再用PBS洗去固定液，加碘化丙啶染色液1ml（20μg/mlPI）,终浓度为50mg/ml，置入4℃冰箱30min后用流式细胞仪检测细胞凋亡。1.4WesternBlot分析提取细胞总蛋白，BCAProteinAssay6Kit定量，80μg蛋白用10％SDS-PAGE分离，转膜，封闭后。加入一抗，二抗，并显色。2结果2.1As2O3诱导对胆囊癌GBC细胞的化疗增敏作用胆囊癌GBC细胞培养24h

8、后分别加入5-氟尿嘧啶（