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时间:2018-08-01
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1、三氧化二砷对胆囊癌细胞化疗增敏作用及其机制研究【摘要】目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用及其机制。方法用流式细胞仪检测As2O3联合5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素作用下胆囊癌细胞凋亡情况。用Westernblot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和PARP的表达。结果在As2O3的协同作用下,5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素对胆囊癌GBC细胞的诱导凋亡作用得到增强;蛋白水平的检测表明Caspase-3和PARP的剪切上升,而Bcl-2的蛋白表达下降。结论As2O3具备对胆囊癌细胞化疗增敏潜能,并主要通过改变Caspase-
2、3、PARP及Bcl-2等的表达来实现。【关键词】三氧化二砷;胆囊癌细胞;化疗;细胞凋亡EnhancedeffectofArsenictrioxideonchemotherapyofgallbladdercarcinomaanditsmechanism[Abstract]ObjectiveTostudytheenhancedeffectofAs2O3onthechemotherapyofgallbladdercarcinomacellanditsmechanism.MethodsFlowcytometricwasusedtodeterminetheapoptos
3、isofGBCcellsconductedbyAs2O3combinedwith5-Fu,MitomycinandAdriamycin.Westernblotwasperformedto6analysisapoptoticproteinsexpressionofCaspase-3,PARPandBcl-2.ResultsTheapoptoticactivityof5-Fu,MitomycinandAdriamycinwereenhancedbyAs2O3.TheproteinsexpressionofCaspase-3,PARPwereup-regulated,
4、howere,thatofBcl-2wasdown-regulated.ConclusionAs2O3couldplayapotentialroletothechemotherapyofgallbladdercarcinomaviaup-ordown-regulationoftheexpressionofapoptoticrelevantprotein.[Keywords]arsenictrioxide;gallbladdercarcinomacells;chemotherapy;apoptosis胆囊癌约占腹部恶性肿瘤的第5位,由于缺乏特异性的临床表现,早期诊
5、断困难,待确诊时多属晚期,手术切除率较低。常规化疗药物对胆囊癌的效果较差,需要寻找治疗胆囊癌新的有效药物。三氧化二砷(As2O3)在治疗急性早幼粒细胞白血病取得了突破性成果[1],国内外的研究也发现,As2O3可诱导多种肿瘤细胞、包括胆囊癌细胞的凋亡[2~4]。本研究探讨As2O3对人胆囊癌GBC细胞化疗增敏作用,并对相关机制做初步研究。1材料和方法1.1细胞和主要试剂As2O3购自Sigma公司,用生理盐水16mmol/L的储存液,使用前用完全培养基稀释到所需浓度。抗Cleaved-Caspase-3、Bcl-2和PARP等的抗体购自CellSignal。抗G
6、APDH的抗体购自SantaCruzBiotechnology。抗HA的抗体购自RocheAppliedScience。人胆囊癌细胞GBC购自中科院细胞所。发光试剂购自AmershamPharmaciaBiotech。1.2细胞培养GBC细胞接种在含10%小牛血清的DMEM培养液中,在温度37℃、5%CO2的培养箱中。取对数生长期的细胞,接种在含10%小牛血清的DMEM培养液中,每孔2×105接种于96孔板、温度37℃、5%CO2的培养箱中。24h后分别加入5-氟尿嘧啶(50mmol/L)、阿霉素(10mmol/L)、丝裂霉素(4μmol/L)及1mmol/LA
7、s2O3连续培养24h,检测细胞凋亡情况。1.3流式细胞仪检测收集1×107个细胞,800g离心10min,0.01mmol/LPBS洗涤1次,用70%冷乙醇固定18h,再用PBS洗去固定液,加碘化丙啶染色液1ml(20μg/mlPI),终浓度为50mg/ml,置入4℃冰箱30min后用流式细胞仪检测细胞凋亡。1.4WesternBlot分析提取细胞总蛋白,BCAProteinAssay6Kit定量,80μg蛋白用10%SDS-PAGE分离,转膜,封闭后。加入一抗,二抗,并显色。2结果2.1As2O3诱导对胆囊癌GBC细胞的化疗增敏作用胆囊癌GBC细胞培养24h
8、后分别加入5-氟尿嘧啶(
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