mir-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析

《mir-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文论文题目miR-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析研究生姓名杨燚指导教师姓名张进平教授专业名称免疫学研究方向淋巴细胞分化发育论文提交日期2013年4月1miR-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析中文摘要中文摘要microRNAs（miRNAs）是真核生物中一类长度约为22个核苷酸，参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA。近年来研究发现，MiRNAs参与了众多的生物学过程，如细胞的增殖分化和凋亡、个体发育和疾病的发生发展。现有的研究表明MiRNAs同样参

2、与了免疫系统的各种细胞的分化发育。为进一步探讨miRNAs在淋巴细胞发育和活化中的作用，我们首先初步研究在部分淋巴细胞（monocytes、proB细胞、T细胞等）中miRNAs的表达差异。结果发现在不同细胞，甚至同一种细胞的不同发育阶段中，其miRNAs的表达谱呈现显著的差异。仔细分析miRNAs在不同免疫细胞中的表达谱，我们发现miR-128-2在DPT细胞中表达与其它检测的细胞有非常显著的差异。由此，在本课题中我们设想通过建立miR-128-2嵌合小鼠模型和miR-128-2转基因小鼠模型来进一步研究mi

3、R-128-2在淋巴细胞分化发育中的作用。为此，首先我们通过q-PCR和流式分析鉴定miR-128-2过表达的质粒pmscv-GW-Rfa-eGFP-miR-128-2能成功表达miR-128-2。在此基础上，为更好的研究miR-128-2对淋巴细胞发育的影响，我们一方面通过制备miR-128-2的逆转录病毒，感染骨髓干细胞，并建立miR-128-2过表达嵌合小鼠模型，通过FACS和PCR检测证明我们的嵌合小鼠模型成功建立。另一方面，为得到更好的稳定的研究模型，我们将pmscv-GW-Rfa-eGFP-miR-

4、128-2用ScaI酶切线性化，并应用显微注射受精卵细胞制备miR-128-2转基因小鼠模型，经PCR检测发现，我们得到5只miR-128-2阳性小鼠模型。同时，我们通过构建miR-128-2的海绵miRNAs表达质粒（pMDH-PGK-GFP-miR-128-2-sponge），并建立miR-128-2-sponge嵌合小鼠和转基因小鼠模型，观察阻滞miR-128-2的表达对淋巴细胞发育的影响。进一步通过FACS分析发现：不管在嵌合小鼠中，还是在转基因小鼠模型中，我们均发现过表达miR-128-2后，其T细胞

5、及各种T细胞亚群的比例和其在正常小鼠中发育无显著差异。但我们发现在过表达嵌合小鼠和转基因小鼠中，不管是在骨髓还是在外周的脾脏中，均出现B细胞的显著减少。而miR-128-2-sponge的嵌合小鼠和转基因小鼠B细胞比例轻度升高。由此我们认为miR-128-2在造血细胞的发育中主要影响了B细胞发育，且呈现为对B细胞的发I中文摘要miR-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析育阻滞作用。进一步研究发现过表达miR-128-2后，并不影响B细胞的自我更新和凋亡，而是通过阻滞CLP向PreProB发育

6、来实现的。最后，我们通过软件分析和PCR、荧光素酶素报告系统等预测miR-128-2在B细胞发育阻滞中的作用机制，初步发现，miR-128-2可能通过作用于多种基因如BCL11a、MALT、A2b等来调控B细胞的发育。其详细机制有待我们进一步探讨。总结我们现有的研究，我们成功建立了miR-128-2过表达嵌合小鼠和转基因小鼠动物模型，及miR-128-2-sponge嵌合小鼠和转基因小鼠等四种动物模型，为进一步研究miR-128-2的生物学功能提供强有力的研究工具。免疫表型结果提示miR-128-2主要阻滞了C

7、LP向B细胞的发育。miR-128-2可能通过影响BCL11a、MALT、A2b等多种基因来调控B细胞的发育。这为阐明B细胞发育的分子调控提供了新的理论解释，也为miRNAs在淋巴细胞发育活化中的作用研究提供新的证据。关键词：miRNAs、miR-128-2、miR-128-2-sponge、嵌合小鼠、转基因小鼠、B细胞发育作者：杨燚指导老师：张进平IImiR-128-2骨髓嵌合和转基因小鼠模型的建立及其免疫表型分析英文摘要TheEstablishmentofmiR-128-2BoneMarrowChimeri

8、candTransgenicMouseModelandtheAnalysisofImmunophenotypesAbstractMiRNAs（miRNAs）are～21ntnon-codingRNAsineukaryoteswhichcanregulategeneexpressionposttranscriptionally.RecentstudiesfoundthatmiRNAsas