mir-128-2小鼠嵌合模型的建立和免疫表型分析

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1、Mir-128-2小鼠嵌合模型的建立和免疫表型分析夏菲杨鍈张进平(通讯作者)(苏州大学生物医学研究院江苏苏州215123)【摘要】microRNA是一类长约24个碱基的非编码RNA,其广泛表达在各种生物体内，发挥重要的调节功能，在免疫系统中，亦有报道认为其参与了免疫细胞的发育、活化等。通过实时定量PCR研究发现：mir-128-2高表达在双阳性、双阴性T细胞和共同淋巴细胞祖细胞中，而在成熟T细胞和成熟B细胞中表达显著降低。为进一步探讨mir-128-2在淋巴细胞发育中的作用，我们通过制备过表达mir-128-2逆转录病毒，并感染小鼠骨髓干细胞制备骨髓嵌合小鼠

2、模型。通过FACS、实时定量PCR及Northern-blot鉴定模型成功建立。进一步使用FACS分析发现mir-128-2过表达后阻碍了B细胞发育，对T细胞发育无显著影响。进一步研究发现mir-128-2过表达后并不影响B细胞的凋亡和自我增殖，而可能是阻止了CLP向PreProB细胞的发育。通过嵌合小鼠模型建立和表型分析可见mir-128-2参与了B细胞发育的调控，表现为阻碍B细胞的发育。【关键词】micmRNAmir-128-2B细胞发育骨髓嵌合小鼠模型【中图分类号】R392【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)01-0013-04T

3、heEstablishmentofMir-128-2BoneMarrowChimericMiceModelandtheAnalysisofImmuno-phenotypeXIAFei,YANGYi,ZHANGJin-ping(InstitutesofBiologyandMedicalSciences,SoochowUniversity,Suzhou,215123JiangsuProvince,China)【Abstract】MiRNAs(miRNAs)areabout24ntnon-codingRNAswhichareexpressedinallorgani

4、smsandplayimportantroles.Intheimmunesystem,theyareinvolvedinthedevelopment,activationofimmunocytes.Atpresentstudy,wefoundthatmir-128-2washighlyexpressedinDN,DPTcellsandcommonlymphoidprogenitorcellsbutlowlyexpressedinthematureTcellsandBcells.Byinfectedhemotopoiticstemcellswithfreshp

5、reparedretrovirusencodingmir-128-2,wesuccessfullyestablishedmir-128-2bonemarrowchimericmiceidentifiedbyFACS,Northern-blotandrealtimePCR.Furtherstudydisplayedthatover-expressedmir-128-2inmiceleadedtotheblocktheBcelldevelopmentbutnotTcell.Mir-128-2didnotaffecttheBcellapoptosisandself

6、-proliferation.Somir-128-2mayinhibitthecommonlymphoidprogenitorcellsdevelopmentintoPreproBcells.【Keywords】microRNAmir-128-2BcelldevelopmentchimericmicemiRNAs是一类长约24个核苷酸的小分子RNA，广泛存在于动物、植物、病毒和单个细胞生物体中。miRNAs存在于基因组的非编码区，属于非编码基因。这些高度保守的RNAs通过特异性地抑制翻译，诱导mRNA降解来调节靶基因的表达，以此参与细胞增生、分化、凋亡等生物

7、学过程和许多疾病的发生、发展。大量的研究表明免疫细胞的分化发育和活化依赖于众多的分子调控，如细胞因子、细胞表面受体、胞内信号传导分子、转录因子等。当这些调节环节出现异常时，不仅免疫细胞本身的分化发育和活化发生障碍，且会导致机体发生免疫缺陷病、自身免疫疾病和各种血液肿瘤等。近年来，少量的研宄数据表明miRNAs亦参与了各种免疫细胞发育的调控。早期B前体细胞中敲除Dicer会使发育滞留在pro-到pre-B阶段［1】，而在T细胞中条件性敲除Dicer也会导致T细胞发育出现缺陷，细胞因子的产生异常［2］。并k胸腺中CD8T细胞发育严重过受阻，CD4细胞数0也减少［

8、3】。关于单个的miRNA对免疫细胞发育的调控也冇众