londonswedish app双突变转基因小鼠模型的建立和初步表型分析

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1、中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文ODOpticalDensity光密度值PAGEPolyacrylamideGelElectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphate--bufferedSaline磷酸盐缓冲液PCRPolytaeraseChainReaction聚合酶链式反应SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基磺酸钠TEMEDN，N，N’，N’一tetraMethylN’N，N’，N’-四甲基乙二酸TBS"IrisBu舵rSaline"Iris缓冲液碱STrishydroxymethylaminomet

2、hane三羟甲基氨基甲烷BSA牛血清白蛋白PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟3中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文中文摘要London／SwedishAPP双突变转基因小鼠模型的建立和初步表型分析阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病，其主要临床表现为进行性记忆减退和认知障碍。AD的主要神经病理学特征为过度的细胞外p淀粉样蛋i兰t(amyloid13protein，A13)沉淀、细胞内神经纤维缠结增多、Tau蛋白的过度磷酸化、突触密度减少、神经元

3、细胞减少等。为了更加深入的探究AD的发病机制，研究人员建立了一系列的动物模型作为研究工具。淀粉样蛋白前体蛋白(Theamyloidprecursorprotein，APP)在AD发病机制中起重要作用，APP经过剪切加工后的A13是AD患者脑内老年斑的主要成分，而点突变的APP则是早发性AD(earlyonsetoffamilialAlzheimer'sdisease，FAD)的主要病因。目前国内外已经建立了多种APP突变型转基因小鼠模型如PDAPP转基因小鼠模型，APP23转基因小鼠模型等，但是大多数模型出现病理及行为学改变的时间比较滞后，通常在六月龄

4、以后才出现上述改变。因此我们建立了London／SwedishAPP双突变转基因小鼠，使小鼠能够比其它APP转基因动物更早的出现病症，提高使用模型进行研究时工作效率。本研究主要包括以下三个部分的实验内容：1．London／SwedishhAPP双突变转基因载体及小鼠的制备：将London／SwedishAPP双突变基因插入到PDGF启动子下游，构建转基4中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文因表达载体，通过显微注射法建立APP695v652汹盼舢帆转基因C57BL／6J小鼠。2．分子生物学水平及病理学分析：采用PCR技术鉴定APP695v6521魈

5、9刚舢597L转基因小鼠的基因表型，鉴定出四只Founder鼠。进一步用RT-PCR和Westernblotting检测hAPP695V652ⅣK596N删597L基因的表达，筛选并建立了2高表达的系APP695V652胀596N删597L转基因小鼠。免疫组织化学显示在海马区双突变APP695V652幽96N舢597L转基因小鼠出现的阳性细胞数目较单突变APP695v6521转基因小鼠及野生小鼠明显增多。常规的病理学检查转基因小鼠脑组织未发现异常。3．行为学检测：采用水迷宫检测系统对APP695v652‘觚96NM597L转基因小鼠的行为学改变进行鉴定

6、。结果显示，三月龄时APP695V6521心96N胀97L转基因小鼠，单突变APP695v6521转基因小鼠及野生小鼠在经过Morris水迷宫隐蔽平台实验时，APP695V6521晒9洲597L转基因小鼠寻找到隐蔽平台的潜伏期比APP695V6521转基Nd,鼠及野生小鼠明显延长。探索试验发现APPV6521帖96N舢597L转基因小鼠比APPv6521转基因小鼠及野生小鼠穿越目标象限的次数明显减少。综上所述，APP695V652撤596N似597L转基因小鼠较APP695V6521转基因小鼠更早的表达m心P，出现学习认知能力障碍的时间明显提前，说明我

7、们成功建立APP695V652帐596N删597L转基因小鼠阿尔茨海默病模型，为研究AD发病机制和药物研发提供了有价值的研究工具。关键词：APP：阿尔茨海默病；转基因；小鼠模型；水迷宫中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文ABSTRACTEstablishmentaAPP695v6s217Ks96N绷鲫7Ltransgenicmousemodelandtheanalysisofpathologicalphono哆peAlzheimer’Sdisease(AD)isacommonneurodegenerativedisease，whichI‘Scha

8、racterizedclinicallybyaprogressivelossofmemorya