牙本质涎磷蛋白转基因小鼠模型的建立和相关研究

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1、第四军医大学博士学位论文牙本质涎磷蛋白转基因小鼠模型的建立和相关研究姓名：孙汉堂申请学位级别：博士专业：口腔临床医学（口内）指导教师：肖明振;费俭2003.4.1秉承学较严谨的学风与优良的科学道德，本八声明所呈交的论文是莪个八在导师指导下进行的砩究工1乍及取得韵研究成果尽我所知，除了文中特别1111l¨标注和致谢的地方9}．论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果．不包含本八或他^已申请学位或其他用途使用过的喊果二与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中lf了明确的说明并表示了致谢，申请学位论文与资料若肓不宴之处．本八承担一切相关责任、～y、论文作者签各：殓i趁7至日期：b一；

2、．’一Z本八完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在枝攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本八保证毕业离校后，发表论文藏睫用论文工怍成果时署名单位仍然为第四军医大学二学校肓权保留送交论文的夏Eli件，允许论文被查阅和借闻；学校可以公布论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影ill、缩印或其他复制手段保存论文，蚓；吉鞲翔、压≮』雌n她峨』期：2哌尊第四军医大学博士学位论文缩略语表缩略语原文Asn(N)asparagineAsp(D)asparticacidBSPbonesialoproteinDGIdentinogenesisimperfectaDPPden

3、tinphosphoproteinDSPdentinsialoproteinDSPPdentinsialophosphoproteinECMextracellularmatfixEScellembryonicstemcellGlu(E)glutamicacidGly(G)glycineNCPnon—collagenousproteinOCPoctacalciumphosphateODopticaldensityOPNosteopontinPhe(F)phenylanalneRGDarginine—glycine·asparagineIU：PCRSer(S)TGFBval(V)reversetr

4、anscription-polymerasechainreactionserineacidtransforminggrowthfactorBvaline译名天冬酰胺天冬氨酸骨涎蛋白牙本质发育不全牙本质磷蛋白牙本质涎蛋白牙本质涎磷蛋白细胞外基质胚胎干细胞谷氨酸甘氨酸非胶原蛋白磷酸八钙光密度骨桥蛋白苯丙氨酸精氨酸．甘氨酸．天冬氨酸反转录一多聚酶链反应丝氨酸转化生长因子B缬氨酸第四军医大学博士学位论文牙本质涎磷蛋白转基因刁、鼠模型的建立和相关研究博士研究生：孙汉堂导师：肖明振教授费俭研究员摘要牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein，DSPP)包括牙本质涎蛋白(dentin

5、sialoprotein，DSP)和牙本质磷蛋白(dentinphosphoprotein，DPP)，属于非胶原蛋白，因最早被发现是由成牙本质细胞合成和分泌，～度被认为是牙本质的特异性蛋白而得名。近年来的研究表明，DSPP在其他组织和器官(如骨、软骨、内耳等)中也表达，只是表达水平相对较低而己，提示QSPP的功能可能并非局限于牙齿的发育和矿化。为进一步探讨DSPP在牙齿发育和矿化中的作用，并在此基础上对DSPP的功能做更加全面的研究，本研究在DSPP功能研究的在体模型的构建方面做了一些尝试，核心内容是建立DSPP的转基因和基因敲除小鼠系。本文是全面研究规划中的～部分，目tJDSP转基因小鼠模型

6、、DSPP四环素调控性转基因小鼠体系、DSPP特异性启动子调控LacZ转基因小鼠模型的建立和DSPP基因敲除载体的构建以及胚胎干细胞基因打靶。(一、DSP转基因小鼠模型的构建、通过亚克隆将pcDNA3．1中的CMV启动子替换为cB．actin启动子，构建载体pcDNA3．1-CX，然后将PCR获得的、末端带有HA—Tag的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3．1一cx中，构建DSP转基因载饲kpcDNA3．1一CX．DSP：用显微注射的方法将BglII酶切线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄第四军医大学博士学位论文原核，移植到假孕母鼠的输卵管；仔鼠出生后，用PCR、基因组Soutllem杂交

7、检测阳性小鼠，结果获得4只GO代小鼠(founder)；阳性鼠分别传代开始建系。选其中一个单系进行了初步的分析，RT-PCR,显／T,转基因能在多个器官中表达。二、DSPP四环素调控性转基因小鼠体系的构建≈,每pTet．on-NSE载体中的NSE启动子替换为启动子cB．actin，构建调控载体pTet．on—CX；j,每DSPP基因编码序列克隆至IjpTRE2@，构建受控载体pTRE2．DSPP；