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1、牙本质涎磷蛋白G0代转基因小鼠的获得论文孙汉堂,肖明振,吴补领,徐国江,费俭【关键词】牙本质涎磷蛋白GenerationoftransgenicmousefoundersofDSPP【Abstract】AIM:Toestablishtetracyclineresponsiveregulatedtransgenicmiceofdentinsialophosphoprotein(DSPP).METHODS:DSPPcodingsequenceidpBluescriptDSPPandthetransgenicvectoredigestionandsequencing,thefinalplasmi
2、dedpTRE2DSPP.AfterlinearizedbyXhoIandrecovery,theplasmidicroinjectedintothemalepronucleusofthezygotesandthezygotesingoodconditionplantedintopseudopregnantmice.ThetailDNAof3bryosplantedto28recipientpseudopregnantmice,entofthetransgeniclineprogressedfromthe6positiveones.CONCLUSION:Thefoundersofthete
3、tracyclineresponsiveregulatedtransgenicmiceofDSPPareestablishedsuccessfully.【Keyice,transgenic;microinjections【摘要】目的:构建四环素调控性牙本质涎磷蛋白(DSPP)转基因体系中的受控小鼠系.方法:从质粒pBluescriptDSPP中,将小鼠DSPP编码序列亚克隆到pTRE2的NotI/SalI位点间,构建转基因载体,经酶切鉴定和测序确认后.freelerPE9700型PCR仪,BioRadSmartSpec3000紫外分光光度计,GIS凝胶图像处理系统.4,加500μL裂解液,
4、50μL蛋白酶K,56℃消化过夜.离心,无水乙醇沉淀,700mL/L乙醇洗涤,干燥后溶解于200μL纯水中,紫外分光光度计定量.转基因阳性鼠.反应条件:95℃预变性5min;94℃变性1min,60℃退火1min,72℃延伸3min,35个循环;72℃延伸10min.Southern杂交:选PCR阳性者,各取DNA30μL(约15μg),用EcoRI消化,电泳,变性,中和,转膜,紫外交联,即可行杂交,探针为以显微注射用DNA为模板、以P1、P2为引物所获得的DSPPcDNA片段.G0代整合小鼠每只一笼饲养,后与C57小鼠配种,雌性1∶1,雄性1∶2.F1代整合小鼠每系取雄性:雌性1∶1~3
5、合笼,F2代即可行纯合子鉴定.建系同时对小鼠进行大体观察.2结果由于pBluescript空载体与含DSPP编码序列的片段大小相当,我们先用PvuI将载体切断,然后用NotI/SalI将含DSPP编码序列的片段切出,故电泳呈现3条带(Fig1A);克隆中,NotI/SalI切出3.0kb及3.8kb者为阳性(Fig1B);PCR鉴定阴性者应当得到约1.8kb的片段,阳性者应当得到约1.0kb的片段,85只小鼠中,符合此条件的为10只,号码为3,7,12,21,25,26,.freelentofimmortalizedhumanodontoblastlikecellline[J].JFour
6、thMilMedUniv,2003;24(10):876-878.[2]陆群,吴补领,周学东,等.小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化[J].第四军医大学学报,2003;24(18):1643-1646.LuQ,ilMedUniv,2003;24(18):1643-1646.[3]QinC,BrunnJC,CadenaE,etal.Theexpressionofdentinsialophosphoproteingeneinbone[J].JDentRes,2002;81(6):392-394.[4]张蓉.牙本质涎磷蛋白在牙齿发育、矿化及牙髓损伤修复中作用的研究[D].西安:第四军医大学口腔医学院,
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