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1、牙本质涎磷蛋白G0代转基因小鼠的获得论文孙汉堂，肖明振，吴补领，徐国江，费俭【关键词】牙本质涎磷蛋白GenerationoftransgenicmousefoundersofDSPP【Abstract】AIM:Toestablishtetracyclineresponsiveregulatedtransgenicmiceofdentinsialophosphoprotein(DSPP).METHODS:DSPPcodingsequenceidpBluescriptDSPPandthetransgenicvectoredigestionandsequencing,thefinalplasmi
2、dedpTRE2DSPP.AfterlinearizedbyXhoIandrecovery,theplasmidicroinjectedintothemalepronucleusofthezygotesandthezygotesingoodconditionplantedintopseudopregnantmice.ThetailDNAof3bryosplantedto28recipientpseudopregnantmice,entofthetransgeniclineprogressedfromthe6positiveones.CONCLUSION:Thefoundersofthete
3、tracyclineresponsiveregulatedtransgenicmiceofDSPPareestablishedsuccessfully.【Keyice,transgenic;microinjections【摘要】目的：构建四环素调控性牙本质涎磷蛋白（DSPP）转基因体系中的受控小鼠系.方法：从质粒pBluescriptDSPP中，将小鼠DSPP编码序列亚克隆到pTRE2的NotI/SalI位点间，构建转基因载体，经酶切鉴定和测序确认后.freelerPE9700型PCR仪，BioRadSmartSpec3000紫外分光光度计，GIS凝胶图像处理系统.4，加500μL裂解液，
4、50μL蛋白酶K，56℃消化过夜.离心，无水乙醇沉淀，700mL/L乙醇洗涤，干燥后溶解于200μL纯水中，紫外分光光度计定量.转基因阳性鼠.反应条件：95℃预变性5min；94℃变性1min，60℃退火1min，72℃延伸3min，35个循环；72℃延伸10min.Southern杂交：选PCR阳性者，各取DNA30μL（约15μg），用EcoRI消化，电泳，变性，中和，转膜，紫外交联，即可行杂交，探针为以显微注射用DNA为模板、以P1、P2为引物所获得的DSPPcDNA片段.G0代整合小鼠每只一笼饲养，后与C57小鼠配种，雌性1∶1，雄性1∶2.F1代整合小鼠每系取雄性：雌性1∶1~3
5、合笼，F2代即可行纯合子鉴定.建系同时对小鼠进行大体观察.2结果由于pBluescript空载体与含DSPP编码序列的片段大小相当，我们先用PvuI将载体切断，然后用NotI/SalI将含DSPP编码序列的片段切出，故电泳呈现3条带（Fig1A）；克隆中，NotI/SalI切出3.0kb及3.8kb者为阳性（Fig1B）；PCR鉴定阴性者应当得到约1.8kb的片段，阳性者应当得到约1.0kb的片段，85只小鼠中，符合此条件的为10只，号码为3,7,12,21,25,26,.freelentofimmortalizedhumanodontoblastlikecellline［J］.JFour
6、thMilMedUniv,2003;24(10):876-878.［2］陆群，吴补领，周学东，等.小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化［J］.第四军医大学学报,2003;24(18):1643-1646.LuQ,ilMedUniv,2003;24(18):1643-1646.［3］QinC,BrunnJC,CadenaE,etal.Theexpressionofdentinsialophosphoproteingeneinbone［J］.JDentRes,2002;81(6):392-394.［4］张蓉.牙本质涎磷蛋白在牙齿发育、矿化及牙髓损伤修复中作用的研究［D］.西安:第四军医大学口腔医学院,
7、2001.［5］PapagerakisP,BerdalA,MesbahM.Investigationofosteocalcin,osteonectin,anddentinsialophosphoproteinindevelopinghumanteeth［J］.Bone,2002;30(2):377-385.［6］孙汉堂.牙本质涎磷蛋白转基因小鼠模型的建立和相关研究［D］.西安:第四军医大学口腔医学院,2003.
