资源描述：
《持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立武小娟，李春富，唐湘凤，石磊【关键词】骨髓移植Establishmentofstablerat→mousehematopoieticchimeramodel 【Abstract】AIM:Toestablishastableanimalmodelofhematopoieticchimerism.METHODS:ConditionedSDratsreceivedbonemarroBALB/cmousetoinducexenogeneicchimericrats.Thirtydayslater,let
2、hallyirradiatedBALB/cmicereceivedbonemarrochimericratsandtheirsurvivalrateonitoreddaily.Recipientsspleniccellsulatedinmixedlymphocyteculture(MLC)eerismover90darroxenogeneicchimeramodelisestablishedbytransplantingbonemarroeras. 【Keyeramodel;arroAb(PharMingen公司)；FITC标记的抗大
3、鼠MHCCLASSⅠmAb(Serotec公司)；3HTdR（中国原子能研究所）；60Co照射源(广东省辐照中心)；流式细胞仪（FACScan;BectonDickinson）；自动液闪计数器（Beckman,USA）. 1.2方法 1.2.1嵌合体模型的建立SD大鼠于术前5d开始饮含红霉素(250mg/L)和庆大霉素(320mg/L)的抗生素溶液.无菌条件下取BALB/c小鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,SD大鼠接受8Gy（照射率0.5Gy/min）全身照射(TBI)后4h内经尾静脉输入BALB/c小鼠骨髓细胞2×108/只,48h后
4、腹腔注射环磷酰胺50mg/kg〔1〕.30h后检测外周血嵌合率为37.39%~47.26%，证实小鼠源性骨髓已在大鼠体内植活.取上述嵌合体SD大鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,BALB/c小鼠肠道净化后接受9Gy全身照射，随即经尾静脉输入上述嵌合体骨髓细胞4×107/只. 1.2.2实验分组以BALB/c小鼠为受鼠的A,B,C,D,E组，均接受9Gy的TBI预处理：A组（8只）输注正常SD大鼠的骨髓细胞;B组（8只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞;C组（6只）为自体移植组，D组（6只）为预处理组，不输注骨髓.以无关第3者B6小鼠为受鼠的E组
5、（6只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞. 1.2.3组织病理检查出现移植物抗宿主病表现的小鼠,濒死前活杀,B组存活者于移植后第60日处死，取其肝、小肠和皮肤标本,以100mL/L甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,光镜下观察.按ThomasGVHD病理组织学分级标准判定〔2〕. 1.2.4嵌合率的测定取移植后小鼠外周血,加入FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(每1×106细胞中加入1μg),避光,4℃,30min.红细胞裂解液去掉红细胞,PBS洗涤2次,流式细胞仪检测嵌合率. 1.2.5皮肤移植及存活情况的观察2.
6、2移植皮肤存活情况BALB/c小鼠对特异供体SD及无关第三者〕.北京:人民军医出版社,1995：351-68. 〔3〕孙敬方,朱德生,郝光荣,等.实验动物学技术〔M〕.北京：科技文献出版社,1997：146-148. 〔4〕SchuurmanHJ,ChengJ,LamT.Pathologyofxenograftrejection:Amentary〔J〕.Xenotransplantation,2003;10(4):293-299. 〔5〕CozziE,VialC,OstlieD,etal.Maintenancetripleimmu
7、nosuppressionycophenolatesodiumandsteroidsalloaterecipientsofhDAFporcinerenalxenografts〔J〕.Xenotransplantation,2003;10:300-310. 〔6〕KnosallaC,CooperDK.Xenotransplantationandtolerance〔J〕.FrontBiosci,2002;7:d1280-d1287. 〔7〕MohiuddinMM,QinY,QianX,etal.Longtermsurvivalofcar
8、diacxenograftsinfullyxenogeneic(mouse>rat)bonemarroeras〔J〕.AnnThoracSurg,2001;72(3):740-745;discussi
