小鼠混合骨髓移植中脾细胞诱导持久稳定嵌合体的作用

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1、小鼠混合骨髓移植中脾细胞诱导持久稳定嵌合体的作用作者：吴迪，张梅，贺鹏程，徐汇，李静，蔡瑞波【关键词】骨髓移植；嵌合体；移植物抗宿主病；脾细胞　　摘要：目的通过小鼠混合骨髓移植模型，将同基因和半相合异基因小鼠骨髓细胞和不同比例脾细胞混合移植给受鼠，探讨诱导持久稳定嵌合体、减轻严重移植物抗宿主病(GVHD)的方法。方法受鼠60Co全身照射，混合输入同基因和半相合异基因供鼠骨髓，同时将两者脾细胞按不同比例混合回输。测定嵌合体形成，观察GVHD表现及病理学改变，监测移植鼠生存率。结果小鼠移植后全部存活超过90d，半相合异基因小鼠脾细胞输注剂量和

2、比例对嵌合体形成的水平和嵌合状态的稳定性有显著影响。结论调整半相合异基因与同基因小鼠脾细胞输注剂量和比例对诱导异体持久植活、避免严重的GVHD的出现具有实际意义。　　关键词：骨髓移植；嵌合体；移植物抗宿主病；脾细胞　　Efficacyofsplenocytesininducingstablelongtermchimerisminmurine　mixedhaploidenticalMHCmatchedbonemarrowtransplantmodel10　　ABSTRACT:ObjectiveToexplorethemethodofindu

3、cingstablechimerismwithoutseveregraftversushostdisease(GVHD)inmurinemixedtransplantmodel.MethodsRecipientmicegiven60CowholebodyirradiationwereinfusedwithsyngeneicandH2haploidenticalmatchedbonemarrowplusdifferentproportionofsplenocytes.Thelevelofthechimerismoftherecipientm

4、icewasdetectedbyflowcytometry.ThemanifestationsandhistopathologicalexaminationofGVHDwereobserved.ThemortalityoftherecipientmicefromGVHDwasobserved.ResultsAllthemicesurvivedover90days.ThedoseofH2haploidenticalmatchedsplenocytesshowedagreatinfluenceonthelevelandstabilityofc

5、himerism.ConclusionItiscriticaltoadjustthedoseofH2haploidenticalmatchedandsyngeneicsplenocytesininducingstablechimerismandavoidingGVHD.　　KEYWORDS:bonemarrowtransplant;GVHD;chimera;splenocyte　　移植物抗宿主病(graftversushostdisease,10GVHD)和移植排斥一直是骨髓移植存在的障碍。临床上常在移植前去除移植物中的淋巴细胞，或在移植

6、后给予大量的免疫抑制剂来控制移植物抗宿主病。去除移植物中的T淋巴细胞在一定程度上减轻了GVHD，但肿瘤的复发率增大，移植物成活的几率降低，延迟了免疫重建［1］。如果长期应用免疫抑制剂可引起肿瘤、感染和各种代谢性疾病。如何在一个合适的同／异基因成熟淋巴细胞比例下，促进异体移植物的持久植活而又不发生严重的GVHD？本文通过建立小鼠混合半相合骨髓移植模型，调整同基因和半相合异基因小鼠脾细胞输注比例，观察其对形成持久稳定的嵌合体以及GVHD的程度的影响。　　1材料与方法　　1.1实验动物①BALB/C小鼠(H2d):部分作为实验组受鼠，部分为同基

7、因供鼠，均为雌性，体重18-20g；②BALB/C×C57BL/6杂交鼠CB6F1(H2d/b):为半相合异基因供鼠，均为雄性，体重18-20g。供、受鼠为清洁级动物，购于第四军医大学实验动物中心，饲养在该中心层流房千级仓中。　　1.2主要试剂和器械PEH2Kb及FITCH2Kd单克隆抗体购于美国Biolegend公司，小牛血清购于兰州民海生物工程有限公司，RPMI1640培养液购买于美国Gibco公司，检测嵌合体所用流式细胞仪(EpicsEliteEps型)为美国Coulter公司产品。　　1.3受鼠BALB/C的预处理10照射前5d到

8、移植后2周BALB/C小鼠饮用加有庆大霉素(32×104u/L)和红霉素(250mg/L)的灭菌蒸馏水。在移植前6h，60Co全身照射，总剂量8.5Gy，剂量率为228cGy/min。　　1.