资源描述：
《关于持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、关于持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立：武小娟，李春富，唐湘凤，石磊【骨髓移植Establishmentofstablerat→mousehematopoieticchimeramodel 【AbstractAIM:Toestablishastableanimalmodelofhematopoieticchimerism.METHODS:ConditionedSDratsreceivedbonemarroBALB/cmousetoinducexenogeneicchimericrats.Thirtydayslater,lethallyirradiatedBALB/cmicer
2、eceivedbonemarrochimericratsandtheirsurvivalrateonitoreddaily.Recipientsspleniccellsulatedinmixedlymphocyteculture(MLC)eerismover90darroxenogeneicchimeramodelisestablishedbytransplantingbonemarroeras. 【Keyeramodel;arroAb(PharMingen公司)；FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(Serotec公司)；3HTdR（中国原子能探究所）；60Co照射源(广
3、东省辐照中心)；流式细胞仪（FACScan;BectonDickinson）；自动液闪计数器（Beckman,USA）. 1.2方法 1.2.1嵌合体模型的建立SD大鼠于术前5d开始饮含红霉素(250mg/L)和庆大霉素(320mg/L)的抗生素溶液.无菌条件下取BALB/c小鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,SD大鼠接受8Gy（照射率0.5Gy/min）全身照射(TBI)后4h内经尾静脉输进BALB/c小鼠骨髓细胞2×108/只,48h后腹腔注射环磷酰胺50mg/kg［1］.30h后检测外周血嵌合率为37.39%~47.26%，证实小鼠源性骨髓已在大鼠体内植活.取上述嵌合体SD大鼠骨
4、髓细胞,制成单细胞悬液,BALB/c小鼠肠道净化后接受9Gy全身照射，随即经尾静脉输进上述嵌合体骨髓细胞4×107/只. 1.2.2实验分组以BALB/c小鼠为受鼠的A,B,C,D,E组，均接受9Gy的TBI预处理：A组（8只）输注正常SD大鼠的骨髓细胞;B组（8只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞;C组（6只）为自体移植组，D组（6只）为预处理组，不输注骨髓.以无关第3者B6小鼠为受鼠的E组（6只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞. 1.2.3组织病理检查出现移植物抗宿主病表现的小鼠,濒死前活杀,B组存活者于移植后第60日正法，取其肝、小肠和皮肤标本,以100mL/L甲醛溶液固定,常规
5、石蜡包埋、切片,HE染色,光镜下观察.按ThomasGVHD病理组织学分级标准判定［2］. 1.2.4嵌合率的测定取移植后小鼠外周血,加进FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(每1×106细胞中加进1μg),避光,4℃,30min.红细胞裂解液往掉红细胞,PBS洗涤2次,流式细胞仪检测嵌合率. 1.2.5皮肤移植及存活情况的观察 3讨论 异种移植的排斥反应包括HAR，急性血管排斥(AVR)以及急性细胞排斥(ACXR).AVR主要以纤维蛋白沉积、出血和血栓导致的广泛缺血缺氧和器官衰竭为特征，血管是受攻击的主要目标，在肾移植中和肾小球血栓型微血管病有关［4］.有关ACXR
6、发生的确切机制尚存在某些不确定因素，在灵长类动物体内，由CD4+和CD8+T细胞共同介导抗猪的免疫反应，NK细胞也起重要的细胞毒功能，异种器官排斥期间发现有细胞性浸润［5］.实际上,异种移植的细胞免疫反应的程度很强,现有的免疫抑制剂能抑制同种异体移植的排斥反应，但不足以控制严重的异种排斥，并且导致长期的免疫缺陷，移植物排斥和病毒复制的激活［6］；因此,很多学者以为异种移植的关键是要诱导对异种抗原的特异性免疫耐受. 利用造血嵌合体诱导供者特异性的耐受被以为是避免排斥较理想的方法.它答应供者和受者骨髓的树突细胞移进胸腺，代表供者和自身抗原，并诱发针对激活的T祖细胞的阴性选择，随即对同一
7、供者的固体器官也产生耐受，而对第3者则排斥.Mohiuddin等［7］给大鼠11Gy致死性照射后，输注处理过的骨髓诱导小鼠→大鼠完全嵌合体模型，随后行供体特异性心脏移植，移植物存活时间明显延长.此外，还有很多实验显示在混合嵌合体中可诱导供者器官长期存活［8-10］.异种移植物抗宿主病（XGVHD）是建创新种造血嵌合体的一个主要障碍，它和同种GVHD有一定的区别,主要是细胞免疫反应很强，XGVHD更为严重，异种组织和器官较同种更难植进；异种供体细胞在受者体内
