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1、实用标准文案MHC相合造血干细胞移植后cGVHD小鼠模型建立李海霞1,王婵2,吴秉毅3,张传仓2(审校),封志纯2(1.北京军区总医院附属八一儿童医院山西医科大学在读硕士研究生;2.北京军区总医院附属八一儿童医院;3.南方医科大学附属珠江医院,指导老师)摘要:目的建立主要组织相容性复合物(MHC)相合造血干细胞移植的慢性移植物抗宿主病(Chronicgraftversehostdisease,cGVHD)小鼠模型,为进一步研究cGVHD的发病机制及防治方法构建平台。方法以雄性DBA/2H-2d为供鼠,雌性
2、BABL/CH-2d为受鼠,接受60Co515Gy全身照射后分成3组,4~6h内完成移植。A组输注RPMI1640培养液、B组输注5@107个脾细胞/只、C组输注10@107个脾细胞/只。（脾细胞移植作用？）观察指标为:¹造血重建时间;º移植物植入情况;»各组小鼠cGVHD的临床表现;¼各组的病理学改变及成模率。结果¹造血重建:C组较A、B组造血重建延迟,差异有统计学意义。º植入情况检测:移植组小鼠均为供、受者共存的混合嵌合体。»cGVHD的临床表现及评分:A组均未出现cGVHD的临床表现,B、C组小鼠出
3、现cGVHD的临床表现,两组的临床评分有统计学差异(P=01016)。¼病理改变及成模率:A组病理学未见明显异常;B、C两组出现cGVHD的病理学改变,但是两组评分无统计学差异(P=01410);根据病理学评分判断各组小鼠的成模率分别为0%、60%、80%。结论60Co515Gy全身照射后输注5@107个脾细胞可诱导出cGVHD小鼠模型,且配型方式与临床MHC相合造血干细胞移植类似,可以作为研究MH精彩文档实用标准文案C相合造血干细胞移植后cGVHD的理想模型。关键词:MHC相合;慢性移植物抗宿主病(cG
4、VHD);小鼠模型中图分类号:R-33文献标识码:A文章编号:1006-9534(2010)07-0026-05异基因造血干细胞移植是目前根治恶性血液系统疾病,以及某些遗传性疾病、免疫缺陷病、实体瘤的最有效方法之一。但是慢移植物抗宿主病(cGVHD)是异基因造血干细胞移植最主要的并发症和导致移植失败及患者死亡的重要原因之一,严重影响了异基因造血干细胞移植治疗的疗效。近年来,尽管移植方式不断改进和新的免疫抑制剂的不断研发,cGVHD仍未得到理想的控制,究其原因是对cGVHD的发病机制了解甚少。因而,建立接近
5、人类cGVHD病理机制及临床表现的动物模型,对cGVHD的研究具有重要意义。本实验受鼠减低剂量预处理后,输注MHC相合、次要组织相容性抗原(mHiAs)不相合的供鼠脾细胞,诱导出类似人类cGVHD表现的小鼠模型,为进一步研究cGVHD的发病机制及防治途径提供平台。（背景）材料与方法1.实验动物:供鼠为雄性DBA/2H-2d小鼠,受鼠为雌性BALB/CH-2d小鼠,均为8-12周,SPF级,由北京市维通利华动物实验公司提供。饲养于北京大学医学部动物实验中心SPF级动物房内,给予无菌食物、高压消毒无菌水、辐照
6、消毒垫料。2.主要试剂及仪器:RPMI1640(无血清)溶液,苔盼蓝染液,秋水仙素,固定液(甲醇B冰醋酸=3B1),倒置显微镜,超净工作台,血细胞计数板,200目不锈钢筛网,低温高速离心机,60Co放疗机精彩文档实用标准文案(由军事医学科学院辐照研究所提供)。3.实验方法:(1)受鼠预处理、分组:受鼠BABL/CH-2d移植前5d开始饮用含庆大霉素(320mg/L)和红霉素(250mg/L)的饮用水,直至移植后2周。移植当天采用60CoC射线全身照射进行预处理,照射剂量为5.5Gy（抑制免疫）。预处理后采
7、用随机字表法分通讯作者:封志纯组,如下:A组单纯照射组(n=10,经尾静脉输注0.5mlRP-MI1640培养液),B组(n=10,经尾静脉输注5@107个脾细胞),C组(n=10,经尾静脉输注10@107个脾细胞)。各组于照射后4~6h内完成移植。(2)供鼠脾细胞制备:将DBA/2供鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下解剖取脾,置200目筛网研磨、过滤,制成单细胞悬液,用红细胞裂解液裂解红细胞后,调节细胞浓度为10@107/ml、20@107/ml备用。(3)外周血染色体制备:小鼠腹腔注射秋水仙素3~4Lg/g,
8、5h后以眼球摘除法,留取0.5~1ml全血(加肝素抗凝),0.075mol/LKCl溶液低渗处理,反复3次固定后滴片,Giemsa染色10min,室温晾干后镜检。4.观察指标(1)造血重建观察:于-1、7、14、21、28天分别检测受鼠外周血白细胞情况,监测造血功能重建时间;(2)移植物植入检测:实验终点B、C组各选取2只小鼠制备外周血单个核细胞染色体标本,计数20个分裂相,检测Y染色体的阳性率。(3)cGVHD的临床评分:脾
