小鼠精原干细胞移植模型的建立

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1、硕硕士学位士论文张飒小鼠小鼠精原干细胞移植模型的建立精原干细胞移植张飒模型的建立2014二○一四年四月分类号S814.8密级公开UDC硕士学位论文小鼠精原干细胞移植模型的建立张飒学科专业动物遗传育种与繁殖指导老师卢克焕教授论文答辩日期2014年5月28日学位授予日期答辩委员会主席石德顺研究员广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工

2、作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。□不保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：日期：指导教师签名：日期作者联系电话：电子邮箱：小鼠精原干细胞移植模型的建立摘要在雄性动物中，精原干细胞在睾丸曲精细管内不断的进行自

3、我更新和分化，是精子发生过程的基础。精原干细胞移植技术是精原干细胞的鉴定的金标准。同时也为治疗雄性不育提供了可能性。本研究是旨在为实验室建立小鼠睾丸模型的平台，为实验室大动物精原干细胞的技术体系奠定基础。第一章：探索白消安处理的条件。试验采用不同的注射部位和不同的白消安浓度来处理小鼠，探索利用白消安清除小鼠精原干细胞的最佳条件。将睾丸相对体重（mg/100g），曲精细管中空率，以及死亡率等参数作为处-1理效果的检测标准。试验结果显示：阴囊注射白消安10mg·kg/侧，在处-1理后6周时相对睾丸重量降到最低。而15mg·kg/侧组在第4周降到最低，达93%，且与第3周差异显著，但

4、与第5周，第6周之间差异不显著。所-1-1以15mg·kg/侧组处理效果比10mg·kg/侧组更好。腹腔注射的三个浓度组，相对睾丸重量从第4周开始与第3周之间差异显著，达到了比较低的水平，但与第5周，第6周之间差异不显著。阴囊注射后第3天，曲精细管中空率与第0d的对照组相比，有明显的处理效果，差异显著。阴囊注-1射10mg·kg/侧组在白消安处理后第6周时，曲精细管中空率达到100%。-1阴囊注射15mg·kg/侧组在第4周时，就达到了100%的中空率，但与第5周，第6周差异不显著。腹腔注射各浓度组从第4周开始，曲精细管中空率都达到100%。之后第5周和第6周曲精细管状态并没有

5、恢复，并维持100%中空状态。总之各组在白消安注射后，睾丸曲精细管内的细胞逐渐死亡，中空率都不断的增高。曲精细管切片观察发现曲精细管内的细胞出现细胞核固缩，核体积变小，是细胞死亡的特征。对于小鼠的死亡率，注射I浓度之间没有差异。但是随着注射浓度的增高，死亡率也有随之增高的趋-1势。腹腔注射40mg·kg的死亡率达到近50%，由此可知，白消安处理小-1鼠的半数致死率（LD50）为40mg·kg。虽然与其他各组差异不显著，但-1-1是明显要高于其他组。阴囊注射15mg·kg和腹腔注射35mg·kg死亡-1率差别不大，但是比40mg·kg组的死亡率低了25%左右。所以最后筛选-1出的

6、最佳注射方法是阴囊注射法，注射浓度是15mg·kg/侧，后期移植的最佳处理时间第5周以保障所移植的供体细胞具有较高的存活率。第二章：利用第一章探索到的白消安处理的条件用来进行受体的制备，然后进行精原干细胞的移植和移植后的检测。试验结果表明，首先合成了9对微卫星引物，并找到了各对引物扩增的最佳退火温度。移植3个月后，进行微卫星检测，在受体鼠附睾的基因组中并未发现供体鼠的微卫星条带。综上所述，本试验优化了白消安注射的条件，熟练的掌握了精原干细胞输出管移植法，为本实验室的小鼠睾丸模型建立了一个技术平台。但是因为注射的细胞并没有在受体鼠睾丸内正常的发育分化，说明方法还不够成熟，需要进一

7、步的探索。关键词：白消安精原干细胞移植微卫星检测IIPRELIMINARYESTABLISHMENTOFAMOUSEMODELFORSPERMATOGONIALSTEMCELLTRANSPLANTSABSTRACTIntheadultmale,spermatogonialstemcellcontinuouslyundergoesself-renewalanddifferentiation,whichisthebasisofspermatogenesis.Spermatogonialstemc