小鼠lewis肺癌胸腔移植模型的建立

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1、小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立【摘要】目的：　通过胸腔移植的方法建立晚期肺癌的动物模型。方法：　经C57BL/6小鼠的腋后线第6肋间胸腔(胸腔模型组)或小鼠腋部皮下(皮下模型组)分别移植鼠源性Lel（5×106ml-1），观察小鼠的生存时间、小鼠体重、饲料消耗量、游泳试验、常压耐缺氧试验，大体观察胸腔、纵隔、胸水等肺癌细胞浸润和转移情况。结果：　胸腔模型组小鼠中位数生存时间13.5（8～18）d，皮下模型组小鼠中位数生存时间45（25～71）d，胸腔模型组的生存期范围离散程度较皮下模型组小（Ｐ0.05）。病程中胸腔模型组小鼠体重下降、摄食减少等

2、恶病质体征较皮下模型组明显（Ｐ0.01），胸腔模型组小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、毛发脱落等现象较皮下模型组多见，胸腔模型组小鼠游泳实验及耐缺氧实验时间较皮下模型组明显缩短（Ｐ0.01），胸腔模型组小鼠早期可出现胸水和肿瘤转移，而皮下模型组小鼠早期未见胸水和肿瘤转移。结论：胸腔移植模型可作为晚期肺癌动物模型。【关键词】Lel-1，链霉素100IU·ml-1）的DMEM(GIBCO公司产品)完全培养液中培养，条件是37℃、5%CO2，2～3d更换1次培养液。细胞总数达到要求时用2.5%胰酶消化。消化前2h新鲜培养液换液1次，消化后再用新鲜培养液洗1

3、次，台盼蓝拒染法测定活细胞数大于95％，调节细胞浓度为5×106ml-1细胞悬液备用。1.2动物有C57BL/6遗传背景的小鼠由徐州医学院实验动物中心提供并饲养于SPF级环境，室温(25±2)℃，给予无菌全价营养颗粒饲料及无菌水。本研究选用的小鼠为6～8周龄的雄鼠200只，体重平均(18±1)g。1.3方法200只小鼠随机分为胸腔模型组和皮下模型组，每组100只，将制作好的Ｌel（5×106ml-1）。1.4生存指标检测1.4.1生存期造模至小鼠死亡的时间。1.4.2体重在每日20:00～21:00时用电子称测量每只小鼠的体重，精确到1/100g，资

4、料存入EXCEL备检验。1.4.3饲料消耗量在每日20:00～21:00时定量给予小鼠饲喂无菌全价营养颗粒饲料，24h测量盒内剩余的饲料量，计算小鼠的饲料消耗量，精确到1/100g。饲料摄取量=前日饲料重量－次日测得饲料重量。1.4.4小鼠游泳实验在每组造模后第14天，令各组动物在水温(17±1)℃下游泳，用相当于小鼠体重10%的橡皮泥在每只小鼠尾部负重，分别放入玻璃缸内游泳并计时，注意观察当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，即刻计时，为小鼠游泳时间，比较各组小鼠因游泳致疲劳而死亡的时间。1.4.5小鼠常压耐缺氧实验每组造模后第14天

5、，各组的小鼠分别放入装有25g钠石灰的容积为250ml的广口瓶内（每瓶置放1只小鼠），用凡士林涂抹瓶口，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间，比较各组常压下的耐缺氧时间。1.4.6大体观察观察胸腔模型组小鼠胸腔、纵隔、心包、胸水等肺癌细胞浸润和转移情况。1.5数据处理用SPSS11.5软件包处理，数据以x±s表示，组内差异采用方差分析（ANOVA），组间差异采用t检验，生存期取中位数并绘制生存曲线，Ｐ0.05为统计学差异有显著性。2结果2.1小鼠生存期观察胸腔模型组中位数生存时间13.5（8～18）d，皮下模型组中位数生

6、存时间45（25～71）d。胸腔模型组的生存期范围离散程度较皮下模型组小（Ｐ0.05）。2.2小鼠生存状态观察胸腔模型组小鼠体重下降、摄食减少等恶病质状态较皮下模型组明显，病程中胸腔模型组小鼠活动减少、睡眠时间缩短、蜷曲、毛发脱落等症状较皮下模型组多见（图1、2）。2.2.1体重平均体重胸腔模型组小鼠为（12.19±4.69）g，皮下模型组小鼠为（19.40±1.10）g，胸腔模型组较相应皮下模型组体重下降明显（Ｐ0.01）。2.2.2饲料消耗饲料平均消耗量胸腔模型组小鼠为（1.67±1.01）g，皮下模型组为(3.16±0.11)g，胸腔模型组与相

7、应皮下模型组相比下降明显（Ｐ0.01）。2.2.3耐缺氧实验及游泳实验平均游泳时间胸腔模型组为(12.67±3.27)s，皮下模型组为(80.33±9.56)s，两组比较差异有统计学意义(Ｐ0.001)。平均耐缺氧时间胸腔模型组为(42.50±5.61)min，皮下模型组为(96.50±23.57)min，两组比较差异有统计学意义（Ｐ0.005）。2.2.4大体观察胸腔模型组小鼠出现胸水和肿瘤转移，如纵隔、心包和肝转移等（图3～6）。皮下模型组未见肿瘤转移。3讨论小鼠的肺肿瘤在组织发生、临床过程和组织形态学上都与人类肺癌有相似之处。特别是应用近交系小

8、鼠，便于实验设计，使动物实验结果准确、均一、经济、重复性强，但直到目前，仍没有令人满意的能充分代表晚期肺癌临