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1、持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立作者：武小娟，李春富，唐湘凤，石磊【关键词】骨髓移植Establishmentofstablerat→mousehematopoieticchimeramodel 【Abstract】AIM:Toestablishastableanimalmodelofhematopoieticchimerism.METHODS:ConditionedSDratsrecEivedbonemarroBALB/cmousetoinducexenogenEIcchimericrats.Thirtydayslater,lethallyi
2、rradiatedBALB/cmicereceivedbonemarrochimericratsandtheirsurvivalrateonitoreddaily.Recipientsspleniccellsulatedinmixedlymphocyteculture(MLC)eerismover90darroxenogeneicchimeramodelisestablishedbytransplantingbonemarroeras. 【Keyeramodel;arroAb(PharMingen公司)；FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(S
3、erotec公司)；3HTdR（中国原子能研究所）；60Co照射源(广东省辐照中心)；流式细胞仪（FACScan;BectonDickinson）；自动液闪计数器（Beckman,USA）. 1.2方法 1.2.1嵌合体模型的建立SD大鼠于术前5d开始饮含红霉素(250mg/L)和庆大霉素(320mg/L)的抗生素溶液.无菌条件下取BALB/c小鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,SD大鼠接受8Gy（照射率0.5Gy/min）全身照射(TBI)后4h内经尾静脉输入BALB/c小鼠骨髓细胞2×108/只,48h后腹腔注射环磷酰胺50mg/kg［1］.30h后检
4、测外周血嵌合率为37.39%~47.26%，证实小鼠源性骨髓已在大鼠体内植活.取上述嵌合体SD大鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,BALB/c小鼠肠道净化后接受9Gy全身照射，随即经尾静脉输入上述嵌合体骨髓细胞4×107/只. 1.2.2实验分组以BALB/c小鼠为受鼠的A,B,C,D,E组，均接受9Gy的TBI预处理：A组（8只）输注正常SD大鼠的骨髓细胞;B组（8只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞;C组（6只）为自体移植组，D组（6只）为预处理组，不输注骨髓.以无关第3者B6小鼠为受鼠的E组（6只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞. 1.2.3组织病理检查出
5、现移植物抗宿主病表现的小鼠,濒死前活杀,B组存活者于移植后第60日处死，取其肝、小肠和皮肤标本,以100mL/L甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,光镜下观察.按ThomasGVHD病理组织学分级标准判定［2］. 1.2.4嵌合率的测定取移植后小鼠外周血,加入FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(每1×106细胞中加入1μg),避光,4℃,30min.红细胞裂解液去掉红细胞,PBS洗涤2次,流式细胞仪检测嵌合率. 1.2.5皮肤移植及存活情况的观察刺激细胞，于96孔培养板每孔加反应细胞4×105个和刺激细胞2×105个，设自体反应孔，
6、每组3复孔，培养96h，终止培养前18h，每孔加入3.7×104Bq（中国原子能研究所），液闪计数器测定，结果用Bq值x±s表示. 统计学处理：实验所得数据以x±s表示,采用SPSS12.0软件进行数据分析.用KaplanMEier估计与绘制生存曲线,用方差分析比较各组脾细胞增殖程度的差异，组间多重比较用LSD法，用秩和检验分析各组移植皮片的存活期，用t检验分析外周血白细胞计数和嵌合率. 2结果 2.1嵌合体模型的生存期A组在BMT后1entofxenotransplantationtoleranceofmouse→ratmodel［J］.Immu
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