藻蓝蛋白联合全反式维甲酸抗肿瘤分子机制研究

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1、藻蓝蛋白联合全反式维甲酸抗肿瘤分子机制研究摘要目的：研究藻蓝蛋白(C—phycocyanin，C—PC)和全反式维甲酸(all—transretinoicacid，ATRA)单独及联合用药对肿瘤细胞体内外生长的影响，并对其抗肿瘤作用机制进行探讨。方法：MTT法检测ATRA和C—PC单独及联合用药对宫颈癌HeLa细胞和肺癌A549细胞生长的影响，TUNEL法检测细胞凋亡情况，免疫组化和Westrenblot法检测Bcl．2和Caspase一3蛋白的表达，原位杂交和免疫荧光法检测CDK一4mRNA和CyclinD1蛋白水平，RT-PCR法检测CD59基因的表达。然后将HeLa

2、细胞注射入NU／NU裸鼠左侧腋窝皮下构建荷瘤小鼠模型，经药物干预后检测瘤块和脾脏重量，特异玫瑰花环形成实验和MTT法检测T淋巴细胞和脾脏细胞的活性，ELISA法检测脾脏细胞培养上清液中TNF的含量，免疫组化和免疫荧光法检测瘤块内Bcl一2和CyclinD1基因的表达。结果：ATRA和C—PC在体内和体外均具有抑制肿瘤细胞生长的作用，当达到相同的抑制率时，联合C．PC使用可以显著降低ATRA的使用剂量从而达到降低毒副作用的目的。两种药物联合用药处于中高抑制率时为协同作用。联合用药可以显著下调抗凋亡Bcl一2和增加促凋亡Caspase一3蛋白的表达，抑制细胞周期相关CDK一4

3、和CyclinD1蛋白的表达，抑制补体调节蛋白CD59的表达。ATRA单独使用会对脾脏和T细胞的活性产生影响，而两者联合用药则对脾脏生长和T细胞活性具有促进作用，并可显著促进脾脏细胞上清液中TNF的表达，还可显著下调肿瘤细胞Bcl一2和CyclinD1蛋白的表达。结论：C—PC和ATRA联合用药具有高效、低毒抗肿瘤作用，其作用机制可能是通过抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡信号转导、促进补体介导的细胞溶解、增强机体的免疫力来实现的。硕士研究生杨帆(遗传学)指导教师李冰教授关键词：全反式维甲酸；藻蓝蛋白；抗肿瘤；机制111111111111111IIIIIIillllllill

4、lllllllIlllY2588662MolecularmechanismofantineoplasticofC—phycocyanincombinedwithall—transretinoicAbstractObjectiveWefocusedonstudyingtheeffectsofall—transretinoicacid(ATRA)，C—phycocyanin(C—PC)orATRA+C—PConthegrowthoftumorcellsinvitroandinvivo．Furthermore，theanticancermechanismofthedrugcom

5、binationwasrevealed．MethodsMTTassaywasadoptedtodeterminetheeffectsofC—PCandATRAonthegrowthofHeLaandA549cells．TheexpressionquantitiesofCDK-4，CyclinD1，Bcl一2，caspase．3andCD59weredeterminedbyinsituhybridization，immunofluorescence，immunohistochemistrystaining，WesternblotandRT-PCR．TUNELassaywas

6、usedtodeterminethecellularapoptosislevels．ThemicemodelwithtumorwereconstructbysubcutaneousinjectionofHeLaorA549cellsintotheleftaxillaofNU／NUmice．Theweightoftumorandthespleenweretested．TheactivitiesofT-cellsandspleencellsweredeterminedbySRFCandMTTassay．TNF．Bcl一2andCyclinD1weredeterminedbyE

7、LISA，immunohistochemistrystainingandimmunofluorescence．ResultsBothC．PCandATRAcouldinhibitthegrowthoftumorcellsinvivoandinvitro．ThedosageofATRAwasreducedwhenitcooperatedwithC—PCSOastoreducethetoxicity．ThecombinationofATRA+C—PCcooperativelyfunctionedinthemediumtohighi