肺癌细胞对顺铂耐药的fabrca途径机制研究

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1、江苏大学硕士学位论文肺癌细胞对顺铂耐药的FA/BRCA途径机制研究姓名：胡一明申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：李坚20120609江苏大学硕士学位论文摘要目的：通过检测经顺铂(DDP)处理后的肺癌细胞增殖抑制率变化，以及肺癌细胞FANCC、FANCF、FANCLmRNA和蛋白表达水平的变化，研究FA／BRCA途径的DNA损伤修复功能在肺癌细胞对DDP耐药机制中的作用。方法：体外培养肺癌细胞株A549、Calu．1和SK．MES．1，采用CCK．8法分别测定经不同浓度DDP处理三个肺癌细胞株24h、48h后的细胞增殖抑制率。用不同浓度DDP处理肺癌细胞后，收集

2、细胞，分别提取总RNA和总细胞裂解物，采用实时荧光定量RT-PCR技术(QRT-PCR)测定三个肺癌细胞株中的FANCC、FANCF、FANCLmRNA表达，应用Westemblotting检测它们的蛋白表达。结果：(1)肺癌细胞A549和Calu．1的细胞增殖抑制率均随DDP浓度和作用时间的不同而变化，呈剂量依赖性(尸

3、g／ml和20lag／ml浓度DDP处理48h后，FANCCmRNA表达明显增高(尸

4、增高后降低(尸

5、癌细胞Calu．1、SK．MES．1对DDP的耐药性显著高于肺癌细胞A549。肺癌细胞Calu—l和SK．MES．1对DDP耐药性增高的机制之一可能是FA／BRCA途径中FANCF和FANCC蛋白高表达的结果，FA／BRCA途径的DNA损伤修复功能在肺癌细胞对DDP耐药中发挥了一定的作用。关键词：肺癌细胞；顺铂；FA／BRCA途径；药物耐受江苏大学硕士学位论文ABSTRACT0bjectiveTostudytheeffectoffanconianemia(FA／BRCA)pathwayinthemechanismofcisplatin(DDP)resistanceo

6、flungcancel"cellsbyanalyzingtherelationshipbetweentheproliferationinhibitionrateoflungcancercellsandFANCC，FANCFandFANCLmRNA，andproteinexpressionaftertreatmentofvariantconcentrationcisplatin．MethodsTheproliferationinhibitionratesoflungcancercelllinesA549，Calu-1andSK·MES-1aftertreatmento

7、fvariantconcentrationDDPweremeasuredusingtheCCK-8assay．Theexpressionlevelsof’FANCC，FANCFandFANCLmRNAweredetectedbyreal-timefluorescentquantitativePCR(RFQ—PCR)．TheexpressionsofFANCC，FANCFandFANCLproteinsweredeterminedbyWesternblotting．Results(1)Theratesofproliferationinhibitingofthree