CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究-论文.pdf

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1、第33卷第4期南京医科大学学报(自然科学版)2013年4月ACTAUNIVERSITAnSMEDICINALISNANJING(NaturalScience)·449·miR．135a／b逆转肺癌A549／CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究周丽，邱天竹，陈雯姣，朱伟，束永前，刘平(南京医科大学第一附属医院肿瘤科，江苏南京210029)[摘要]目的：研究miR．135a／b对肺癌耐顺铂细胞株A549／CDDP顺铂耐药的影响。方法：运用实时荧光定量PCR检测miR一135a／b在A549和A549／CDDP细胞株中的差异表达；MTF法检测转染后A549及A549／CDDP细

2、胞对CDDP的敏感性；构建MCL1．3'-UTR荧光素酶报告质粒验证miR一135a／b的靶基因：Westernblot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异；流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响。结果：miR一135a／b在A549／CDDP细胞中表达量降低；在耐药株中上调miR一135afb后显著增加细胞对顺铂的敏感性；荧光素酶实验证实MCL1是miR．135a／b的靶基因；抗凋亡蛋白MCL1在A549／CDDP细胞中呈高表达，上调miR．135a／b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达：miR一135a／b显著增加A549／CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡。结

3、论：miR—I35a／b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡。[关键词]miR一135a／b；顺铂耐药；凋亡；MCL1；肺癌[中图分类号]R734．2[文献标志码]A[文章编号]1007—4368(2013)04—449—07doi：10．7655／NYDXBN$20130406MechanismofmiR-135a／bonregulatingcisplatinresistanceofhumanlungcancercelllineA549／CDDPZhouLi，QiuTianzhu，ChenWenjiao，ZhuWei，ShuYongqian，

4、LiuPing(DepartmentofOncology，theFirstAffiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029，China)[Abstract]Objective：ToinvestigatewhethermiR一135a／bcouldmodulatethedrugresistanceofthehumanlungcancercelllineA549／CDDPtocisplatin(CDDP)，andexplorethemechanismofmiR一135a／bontheCDDPsensitivityofA549／CDDPcells．Me

5、tbods：MiR一135a／bexpressionwasmeasuredbyquantitativerea1．timePCR．TransienttransfectionwasusedinA549andA549／CDDPcelllines．CellviabilitywasdetectedbyMT'Fassay．MCL13’．untranslatedregion．basedluciferasereporterplasmidswasconstructedtotestifythetargetgeneofmiR一135a／b．Proteinexpressionsweremeasur

6、edbywesternblot．FlowcytometrywasusedtodetectCDDP-inducedapoptosis．Results：WefoundthatmiR一135a／bweredownregulatedwhileMCL1wasupregulatedinA549／CDDPcells．comparedwiththeparentalA549cells．Invitrodrugsensitivityassaydemonstratedthattheover-expressionofmiR一135a／bsensitizedA549／CDDPcellstocispla

7、tin．TheluciferaseactivityofMCL13’一untranslatedregion—basedreporterconstructedinA549／CDDPcellssuggestedthatMCL1wasthedirecttargetgeneofmiR-135a／b．EnforcedmiR一135a／hexpressionreducedMCL1proteinlevelandsensitizedA549／CDDPcellstoCDDP—inducedapoptosis．Conclusion：Th