尼洛替尼与三氧化二砷对慢性粒细胞白血病k562细胞诱导分化作用及机制研究

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3、大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声明人(签名)．研彳砷JIP年多月fo日摘要实验目的观察不同浓度的三氧化二砷(ATC})、尼洛替尼(AMNl07)对慢粒急变K562细胞株诱导分化作用及两药联合在诱导分化是否有协同作用，初步探讨两药诱导分化作用的机制，为慢性粒细胞白血病急变的临床治疗提供实验依据。实验方法以慢粒急变期KS62细胞为研究对象，先用不同浓度三氧化二砷(O。l，0．5，1．O，2．O，5．O岫。儿)作用

4、于K562细胞，MTT法检测K562细胞生长情况；联苯胺染色检测血红蛋白含量变化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CD4l、红系分化抗原GPA表达量；R1、-PCR检测造血分化因子BTGl、TALl训刚A表达量及W色stemblot检测BTGl、吖也1蛋白表达量。然后再分别用O．005脚础『L尼洛替尼与l肛mol甩三氧化二砷单独或联合作用K562细胞24、48、72h，MTT法检测K562细胞生长抑制率及在抑制增殖方面有无协同作用；瑞氏吉姆萨染色观察细胞分化形态；联苯胺染色检测血红蛋白含量，观察是否向红系分

5、化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CDl41、红系分化抗原GPA、粒系分化抗原CDllb、单核系分化抗原cDl4表达量；R1、-PCR检测造血分化因子BTGl、可江l砌RNA表达量及WeStemblot检测BTGl、吖山1蛋白表达量。实验结果MTT及形态学结果显示各浓度组—蛆。对K562细胞的增殖都有抑制作用，且呈现一定浓度和时闻依赖性，以浓度为5岫10l／L的ATO于72h最为显著。经1岬01几ATO诱导后，联苯胺阳性细胞率由对照组2．87％士O．63％升高至17．63％土1．18％(尸

6、红系分化特异标志GPA由对照组的3．39％士0．84％增加至68．46％士3．67％(尸<融01)，巨核系CD41表达升高，但没有GPA明显，同时伴随着分化相关转录因子TALl、BTGlmRNA及蛋白表达量升高。与对照组相比，单药AT0组、AMNl07组及联用组对K562细胞的增殖都有抑制作用l摘要(尸

7、部分细胞向粒系分化。联苯胺染色及流式细胞术结果表明单药及联用组均可诱导K562细胞向红系分化，ATO组没有AMNl07组效果明显，且两药联用对细胞向巨核系及粒系分化有较强协同作用，westem-blot、PCR结果提示，与对照组相比，单用组及联用组雕儿l、BTGl蛋白及mRNA表达量均有所上调。实验结论AT0及AMNl07对K562细胞有明显增长抑制作用，两者具有协同作用；ATO、AMNl07均可单独诱导K562细胞红系分化，但ATO的诱导效应不如AMNl07明显，对巨核系及粒系分化效果不明显；两药联用时红系分化效应较

8、AMNl07单独作用略微减弱，但对巨核系及粒系有较强的协同效应。关键词：三氧化二砷尼洛替尼K562细胞分化Abstract0bjectiveTbdetemine吐1ee彘ctof雒scllictrioxide鼬砖AM；N107aloneorincomb哦ionon也eproliferation柚ddi位fentiationofch