人类博卡病毒-1型启动子分析及非结构蛋白ns1反式作用的研究

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1、分类号——UDC密级——编号——中唯币鬣火等士学位论文学位申请人姓名：圭盎遨申请学位学生类别：全旦刿塑±申请学位学科专业：微生物指导教师姓名：圭墼垄遂瑶中项1-一●1r⑨嘶MASTER⋯'STHE哪硕士学位论文人类博卡病毒一1型启动子分析及非结构蛋白NSl反式作甩的研究论文作者：李永淑指导教VS-李毅教授学科专业：微生物研究方向：分子病毒学华中师范大学生命科学学院2014年5月⑨硕士学位论文MASTER’STHESISTheAnalysisofHumanBocavirus-l(HBoVl)Promote

2、randtheTrans—-activationofthenonStructuralProteinNS1AThesiSSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheM．S．DegreeinmicrobiologyByLiYongshuPostgraduateProgramCollegeofLifeScienceCentralChinaNormalUniversitySupervisor：LiYiAcademicTitle：ProfessorApp

3、rovedMay,2014⑧硕士学位论文MASTER’STHESlS华中师范大学学位论文原创性声明和使用粼明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：巷钮趾日期：2014年05月24日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即

4、：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。n．．卫作者签名：乃争阻导师签名：，，锄日期：2014年05月24日本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文

5、数据库发布章程"，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。匣重诠塞握銮后溢卮i旦半生；旦二生；旦三生筮查!作者签名：劣争论L日期：2014年05月24日导师签名：日期：2014年05月24日⑨硕士学位论文MASTER’STHESIS摘要人类博卡病毒-1(Humanbocavirus1，HBoVl)归类于细小病毒科，细小病毒亚科，博卡病毒属。基因组全长约5．5kb，含左端唯一启动子，编码两个非结构蛋白NS1(nonstructuralpr

6、otein)和NPl(nuclearphosphoprotein)，两个结构蛋t兰IVPl(vira1structuralprotein1)与VP2(viralstructuralprotein2)。NPl是博卡病毒的特有蛋白，对其研究已经取得一定的进展，如存在一个非典型的核定位信号，调节炎症因子的表达，诱导细胞凋亡等等。但作为在病毒感染细胞后最先被转录和翻译且对其基因组复制必须的非结构蛋白NSl，却研究甚少。本课题对我们前期研究中分离到的武汉HBoVl病毒株(pWHL一1NCBIGeneBank：GU

7、l39423)的启动子及NSl进行了初步研究。将全长252nt的启动子截短突变，运用双荧光素酶报告系统检测各截短突变的表达活性。结果显示，在96—145nt内有一些可能的转录因子结合位点，对启动子的活性有重要的影响，而146—196nt为启动子的核心区域。对96-145nt内的部分核心元件进行点突变后，发现CAAT—box的突变会导致启动子的活性显著降低，而TATA—box及CREB、CdxA两个可能的转录因子结合位点的突变对其活性却无显著影响。同样运用双荧光素酶报告系统探究了HBoVl的NSl对自身启

8、动子及转录因子AP一1、NF-rB、STAT3和GAS启动子的正调控活性，发现lNSl的274—379aa为反式作用的关键性区域，AP—l、NF．r．B、STAT3启动子受NS1的调控，对GAS启动子活性并无显著影响。并将NSl基因全长及截短克隆至IJpEGFP州1载体中，研究其在细胞内的定位，证实在180—274aa内有入核信号(NuclearImportSignal，NLS)，340—562aa内有核输出信号(NuclearExport