猪细小病毒自然弱毒N株非结构蛋白NS1基因原核表达.pdf

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1、广西农业科学2010。41(7)：710-713GuangxiAgIiculturalSciences猪细小病毒自然弱毒N株非结构蛋I兰INS1基因原核表达苏乾莲1，李斌1，赵武”，梁家幸t，梁保忠-，何颖-，秦毅斌L2，何苹萍·，2(1广西兽医研究所，南宁530001；2广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：为进一步探讨猪细小病毒自然弱毒N株(PPV—N株)的分子病原学机理，根据GenBank上已发表的PPV金基因组序列(登录号NC_001718)设计1对引物，通过PCR方法扩增获得PPV—N株NSl全长基因，将其克隆到pMDl8一T载体上，进而构建原核表达重组质粒pE

2、T32a—NSl，并在BL21(DE3)pLysS中进行IPTG诱导表达。SDS—PAGE电泳显示NSI在大肠杆菌中得到成功表达，重组蛋白大小约为90．0kDa；Westernblotting分析表明，该蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应，证明该蛋白具有良好生物学活性。NSI在大肠杆菌中成功表达，且具有免疫原性，可作为PPv临床鉴别诊断抗原。关键词：猪细小病毒；自然弱毒N株；NSI；原核表达中图分类号：$858．28文献标识码：A文章编号：1002—8161(20lO)07—0710—04EXl：6‘。proteinNS1Expressionoinon-structuralprot

3、einN12enei‘nporci‘negeneparvovirus(PPV-N)strainSUQian-lianl，LIBinl，ZHAOWu”，LIANGJia-xin91，LIANGBao-zhon91，HEYin91，QINYi-binl，2HEPing-pin91’2(1Guangx／VeterinaryResearchInstitute，Nanning530001，China；2CollegeofAnimalScienceandTechnology，Guan函University。Nanning530005，China)Abstract：Thepresentexperi

4、mentW88conductedtostudythemolecularetiologicalmechanismofporcineparvovirusNstrain．ApairofprimerwasdesignedfromPPVgenomesequencespubhshedinGenBank(AccessionnumberNC．001718)．ThewholegenicsequenceofNSIinPPv—NstrainWasamplifiedbyusingPCRtechnologyandclonedintopMDl8-Tvector．TherecombinantofpET32a-NS

5、IWastransformedintoBL21(DE3)pLysScompetentcellandinducedtoexpressbyLPTG．SDS-PAGEresultsshowedthattheNSlproteinWassuccessfullyexpressedinEco／iwitharelativemolecularweightof90kDa．TheresultsofWesternblottingshowedthattIlisproteinWasspecificallyreactedwitllporcineparvovimspositiveserum．indicatingth

6、erecombinantproteinhadbiologicalactivity．NSIproteinWasexpressedinEco／iandshowedimmunogenieity．whichcouldbeused踮antigenindiagnosticassayfordetectionofantibodiesofPPV．Keywords：porcineparvovirus；Nstrain；NSl；prokaryoticexpression猪细小病毒(Porcineparvovirus。PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。1967年Cartwright等[1】首次分离获得

7、PPV，并证实该病毒对猪不孕症、流产和产死胎等具有致病性。PPV全基因组编码有3种结构蛋白(VPl、VP2、VP3)和3种非结构蛋白(NSl、NS2、NS3)，其中非结构蛋白NSl在PPV早期和晚期的转录发挥着重要作用【2】。NSl在PPV进行复制时大量表达，而在成熟病毒粒子中含量很少，很难分离获得[31。PPV在DNA合成起始时感染宿主细胞，即在感染细胞的细胞质中可分离出NSl。此外。有研究表明灭活疫苗很难刺激机体产生NSl抗体。但自然感染则可产生大量抗