麻疹病毒N蛋白原核表达纯化条件的优化.pdf

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1、第28卷第6期郑州轻工业学院学报(自然科学版)Vo1．28No．62013年l2月JOURNALOFZHENGZHOUUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY(NaturalScience)Dec．20l3文章编号：2095—476X(2013)06—0032—03麻疹病毒N蛋白原核表达’纯化条件的优化侯丹丹，王云龙，张怡青，孙新城，李玉林。，米海。，王继创，程蕾(1．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；2．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州450001；3．河南省生物工程技术研究中心，河南郑J,I1450001)摘要：通过构建重组表达质粒，诱导表达

2、纯化麻疹病毒N蛋白．将麻疹病毒N蛋白基因片段与载体pET一32a(+)相连接，通过PCR方法扩增获得重组质粒pET一32a(+)／N，然后将重组质粒转入大肠杆菌E．coliBI21(DE3)内，并优化诱导表达时间、温度、诱导剂浓度等条件．SDS—PAGE和West．ernblot蛋白印迹检测表明，麻疹病毒N蛋白分子质量约为60kD，表达产物用Ni—NTA亲和层析和DEAE纯化后，纯度达90％．关键词：麻疹病毒；核壳蛋白；原核表达；蛋白纯化中图分类号：Q786．4文献标志码：ADOI：10．3969／j．issn．2095—476X．2013．06．008Optimizationo

3、fmeaslesvirusNproteinSprokaryoticexpressionandpurificationHOUDan—dan，WANGYun—long，ZHANGYi．qing，SUNXin．cheng，LIYu—lin，MIHai，WANGji．chuang，CHENGLei。(1．ColldgeofLifeScience，HelzanNormalUniversity，Xinxiang453007，China；2．CollegeofFoodandBioengineering，ZhengzhouUnive~ityofLightIndustry，Zhengzhou450

4、001，China；3．Hei?~tnBiotechnologyResearchCenter，Zhengzhou450001，China)Abstract：Inordertoconstructarecombinantexpressionplasmidwhichinducedexpresspurificationmea．slesvirus(MV)Nprotein，therecombinantplamisedofpET一32a(+)／NamplifiedbyPCRfromMVNproteingeneswasinsertedintoexpressionvectorpET一32a(+)，

5、thenitwastransformedintoE．coliBL21(DE3)．Theconditionoftime，temperatureandconcentrationofIPTGwereoptimized．TheresultsofSDS．PAGEandWesterublottestsshowedthatMVNproteinmolecularwas60kD．TheproteinSpuritywas90％afterbeingpurifiedbyNi．NTAandDEAE．Keywords：measlesvirus；Nprotein；prokaryoticexpression；p

6、roteinpurification收稿日期：2013—04～12作者简介：侯丹丹(1985一)，女，河南省许昌市人，河南师范大学硕士研究生，主要研究方向为微生物通信作者：王云龙(1962一)，男，河南省洛阳市人，河南师范大学教授，主要研究方向为生物制药．第6期侯丹丹，等：麻疹病毒N蛋白原核表达纯化条件的优化·33·物，0．2ixL；DNA聚合酶，0．3L；模板，0．5L；dd0引言H0，4IxL)扩增目的基因片段，扩增产物与pET一麻疹是一种高度传染的呼吸道疾病，具有典型32a(+)载体经BamHI，XhoI双酶切后，由T4的临床症状，包括斑丘疹、发热、咳嗽、鼻炎和结膜DNA连

7、接酶连接双酶切产物而构建重组质粒炎．麻疹病毒是麻疹的病原体，分类上属于副黏病pET一32a(+)／N；2)将质粒转入宿主细胞大肠杆毒科麻疹病毒属．麻疹病毒可以划分为8个基因组菌中，接种于lmLLB液体培养基中，37cC摇床培(A—H)，21个基因型，核壳蛋白(N蛋白)是麻疹病养1h，然后取菌液5OL转接于3．5mLLB(含毒的主要抗原，可产生中和(Nt)抗体．在研究基因Amp30mg／mL)液体培养基中，培养至OD6oo约为工程麻疹疫苗中，N蛋白基因是首选的病毒抗原J，0．3～0